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sls19881024银虫 (小有名气)
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[求助]
原核表达相关操作
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| 大家在做原核表达的时候有没有遇到连接不上的情况啊 双酶切的条带都很单一，T4 ligase连接过夜后，涂平板不长菌斑咋回事啊？ |
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bleach060452
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sls19881024: 金币+5, ★有帮助 2013-07-06 07:45:48
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连接就是这样的，首先你要优化体系、操作，然后有时真的是靠运气的。。。。 建议：1.像楼上说的，确定酶切没问题 2.优化片段与质粒的配比，可以多做几个配比的同时连接过夜 3.16度或22度（根据连接酶来确定）连接过夜后，转一批；剩下的继续4度连接几小时转一批；甚至4度连接1天以后都可以试一下的 4.最后确定抗生素、浓度是否正确 5.祈求好运。。。 |
5楼2013-07-05 10:49:20
武穆大成
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sls19881024
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4楼2013-07-05 09:18:06
