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ljj0720

银虫 (正式写手)

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[求助] 克隆表达引物设计

急急急现在我知道某基因的全长要扩增全长引物怎么设计啊网上有这样说的：

1、从你的全长基因的正义链直接数出16-20个碱基（从ATG开始），然后在它的5‘端加上游酶切位点，如果需要的话加上保护碱基。
2、从你的全长基因的反义链从5’-3‘端直接数出16-20个碱基，后在它的5‘端加上游酶切位点，如果需要的话加上保护碱基。
这样引物就设计好了。
注意：上下游的酶切位点不要设计反了。

难道不用软件分析吗

[ Last edited by 1949stone on 2013-7-5 at 09:46 ]

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1楼2013-07-04 15:48:58

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lhs521521

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【答案】应助回帖

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gyesang: 金币+2, 鼓励回帖应助！ 2013-07-04 19:46:50

网上说的简单了点，差不多就是那个意思，不过要根据具体的基因来决定，比如长度太长（4-7kb），扩起来比较麻烦，还要保证高保真性也很难，测序也会很费劲。不过大部分都还好，简单来说，还是需要软件合适一点，软件会给出最佳的上下游引物组合，上游需要包括ATG，如果载体没有增强翻译的cozak序列，你自己最好加一个，下游要包含终止序列。扩增要用高保真酶。