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lillian菲

银虫 (小有名气)

[交流] SDS-PAGE电泳图这样算成功吗？

大家好，最近在做SDS-PAGE，大家帮帮看看这个图可以接着做WESTERN BLOT吗？我老板说这图表达量不行，不能接下来做WESTERN BLOT，我很是郁闷。（蛋白大小在marker97.2附近，1.3泳道是未诱导，2,4是诱导）请大家帮忙分析下是否有表达，谢谢！
SDS-PAGE电泳图这样算成功吗？
360截图20130701104500153.jpg
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脱水拂空

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1楼2013-07-01 10:46:28
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lillian菲

银虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by sl35537417 at 2013-07-01 14:20:08
貌似有点过表达的意思  但是应该是少下面的那条带 不是你指的那条！再着 理论上过表达应该很多 很明显 但是由于蛋白不一  在体内收到的调控就不一样  最终表达的量也就不一样  这种情况也经常碰到  可以wb检测一下试 ...

老板就是因为表达的量不是很大，所以不让我做western blot，说这个做出来了WB就很容易做了，哎。嗯，我指的是不太确切，应该是再往下一点的那条带
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6楼2013-07-01 14:28:46
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kx444555

至尊木虫 (正式写手)
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gyesang: 金币+2, 鼓励回帖应助！ 2013-07-04 01:41:17
WESTERN BLOT还是很灵敏的，够做WESTERN BLOT的，但是这个量够不够用还要看你接下来要做什么试验
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2楼2013-07-01 11:47:39
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bleach060452

新虫 (小有名气)
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gyesang: 金币+2, 鼓励回帖应助！ 2013-07-04 01:41:28
WB是可以检的，因为很灵敏，可以看到条带就足够检测了。

但是你这又到之后几乎没变化呀，都是本地表达~~优化下表达条件吧，表达量确实差点，可以说表达这一步的实验结果较差，老板应该是觉得你这一步没做好呢，不让你做WB，毕竟抗体不便宜。

如果不是做重组表达，变化再明显点就说的过去了，可以WB之。如果是重组表达，那么这根本不行，少年，别浪费抗体钱~~
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3楼2013-07-01 14:03:17
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lillian菲

银虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by bleach060452 at 2013-07-01 14:03:17
WB是可以检的，因为很灵敏，可以看到条带就足够检测了。

但是你这又到之后几乎没变化呀，都是本地表达~~优化下表达条件吧，表达量确实差点，可以说表达这一步的实验结果较差，老板应该是觉得你这一步没做好呢，不 ...

谢谢指点，我的是重组表达，是不是表达量应该很大才对是吧？
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4楼2013-07-01 14:14:35
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sl35537417

木虫 (正式写手)
★ ★ ★
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gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2013-07-04 01:41:38
貌似有点过表达的意思  但是应该是少下面的那条带 不是你指的那条！再着 理论上过表达应该很多 很明显 但是由于蛋白不一  在体内收到的调控就不一样  最终表达的量也就不一样  这种情况也经常碰到  可以wb检测一下试试
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5楼2013-07-01 14:20:08
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透明的玻璃杯

铁虫 (初入文坛)
★ ★
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gyesang: 金币+1, 鼓励回帖应助！ 2013-07-04 01:41:49
你老板是要提高表达吧，你是想确定是否表达。两个目的不一样的。WB可做，但老板更要命啊
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7楼2013-07-01 16:24:54
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lemontree7681

银虫 (小有名气)
★
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如果表达量高高的，就不要做WB鉴定了吧
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8楼2013-07-02 19:46:22
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lillian菲

银虫 (小有名气)
引用回帖:
8楼: Originally posted by lemontree7681 at 2013-07-02 19:46:22
如果表达量高高的，就不要做WB鉴定了吧

我也是这么觉得的，但老板就说要表达量很高，才让做wb，估计想一次成功吧，心疼抗体啊，呵呵
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9楼2013-07-02 19:51:36
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lemontree7681

银虫 (小有名气)
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gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2013-07-04 01:41:59
如果是ECL发光检测，检测下限是ng级别，外源表达的蛋白检测不出来只有抗体的原因，如果抗体好，不可能检测不出的
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10楼2013-07-03 19:26:23
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脱水拂空

铜虫 (正式写手)
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送红花一朵
gyesang: 金币+1, 鼓励回帖交流！ 2013-07-04 01:42:07
蛋白表达量不高 效果不是很明显 重新优化一下条件
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11楼2013-07-03 23:46:47
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毛毛和虫虫

新虫 (初入文坛)
★
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应该是什么样的呢
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12楼2013-12-17 15:02:16
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cakala

新虫 (初入文坛)
★
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亲，你这个图很漂亮呢。我的总是弥散能给分析分析原因吗？你用的溶液的PH都是多少呀？
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13楼2014-03-12 08:52:40
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jurkat.1640

至尊木虫 (文坛精英)
★
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做WB肯定没问题，灵敏度远远高于考染。不过你的表达不够多，我见过表达高的蛋白约占总蛋白的1/2。你的蛋白分子量大，不容易高表达
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14楼2014-03-12 09:16:00
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