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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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lillian菲

银虫 (小有名气)


[交流] SDS-PAGE电泳图这样算成功吗?

大家好,最近在做SDS-PAGE,大家帮帮看看这个图可以接着做WESTERN BLOT吗?我老板说这图表达量不行,不能接下来做WESTERN BLOT,我很是郁闷。(蛋白大小在marker97.2附近,1.3泳道是未诱导,2,4是诱导)请大家帮忙分析下是否有表达,谢谢!
SDS-PAGE电泳图这样算成功吗?
360截图20130701104500153.jpg
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lillian菲

银虫 (小有名气)


引用回帖:
5楼: Originally posted by sl35537417 at 2013-07-01 14:20:08
貌似有点过表达的意思  但是应该是少下面的那条带 不是你指的那条!再着 理论上过表达应该很多 很明显 但是由于蛋白不一  在体内收到的调控就不一样  最终表达的量也就不一样  这种情况也经常碰到  可以wb检测一下试 ...

老板就是因为表达的量不是很大,所以不让我做western blot,说这个做出来了WB就很容易做了,哎。嗯,我指的是不太确切,应该是再往下一点的那条带
6楼2013-07-01 14:28:46
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普通回帖
★ ★ ★
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gyesang: 金币+2, 鼓励回帖应助! 2013-07-04 01:41:17
WESTERN BLOT还是很灵敏的,够做WESTERN BLOT的,但是这个量够不够用还要看你接下来要做什么试验
2楼2013-07-01 11:47:39
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bleach060452

新虫 (小有名气)


★ ★ ★
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gyesang: 金币+2, 鼓励回帖应助! 2013-07-04 01:41:28
WB是可以检的,因为很灵敏,可以看到条带就足够检测了。

但是你这又到之后几乎没变化呀,都是本地表达~~优化下表达条件吧,表达量确实差点,可以说表达这一步的实验结果较差,老板应该是觉得你这一步没做好呢,不让你做WB,毕竟抗体不便宜。

如果不是做重组表达,变化再明显点就说的过去了,可以WB之。如果是重组表达,那么这根本不行,少年,别浪费抗体钱~~
3楼2013-07-01 14:03:17
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lillian菲

银虫 (小有名气)


引用回帖:
3楼: Originally posted by bleach060452 at 2013-07-01 14:03:17
WB是可以检的,因为很灵敏,可以看到条带就足够检测了。

但是你这又到之后几乎没变化呀,都是本地表达~~优化下表达条件吧,表达量确实差点,可以说表达这一步的实验结果较差,老板应该是觉得你这一步没做好呢,不 ...

谢谢指点,我的是重组表达,是不是表达量应该很大才对是吧?
4楼2013-07-01 14:14:35
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sl35537417

木虫 (正式写手)


★ ★ ★
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gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流! 2013-07-04 01:41:38
貌似有点过表达的意思  但是应该是少下面的那条带 不是你指的那条!再着 理论上过表达应该很多 很明显 但是由于蛋白不一  在体内收到的调控就不一样  最终表达的量也就不一样  这种情况也经常碰到  可以wb检测一下试试
5楼2013-07-01 14:20:08
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透明的玻璃杯

铁虫 (初入文坛)


★ ★
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gyesang: 金币+1, 鼓励回帖应助! 2013-07-04 01:41:49
你老板是要提高表达吧,你是想确定是否表达。两个目的不一样的。WB可做,但老板更要命啊
7楼2013-07-01 16:24:54
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lemontree7681

银虫 (小有名气)



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如果表达量高高的,就不要做WB鉴定了吧
8楼2013-07-02 19:46:22
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lillian菲

银虫 (小有名气)


引用回帖:
8楼: Originally posted by lemontree7681 at 2013-07-02 19:46:22
如果表达量高高的,就不要做WB鉴定了吧

我也是这么觉得的,但老板就说要表达量很高,才让做wb,估计想一次成功吧,心疼抗体啊,呵呵
9楼2013-07-02 19:51:36
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lemontree7681

银虫 (小有名气)


★ ★ ★
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gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流! 2013-07-04 01:41:59
如果是ECL发光检测,检测下限是ng级别,外源表达的蛋白检测不出来只有抗体的原因,如果抗体好,不可能检测不出的
10楼2013-07-03 19:26:23
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脱水拂空

铜虫 (正式写手)


★ ★
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送红花一朵
gyesang: 金币+1, 鼓励回帖交流! 2013-07-04 01:42:07
蛋白表达量不高 效果不是很明显 重新优化一下条件
11楼2013-07-03 23:46:47
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毛毛和虫虫

新虫 (初入文坛)



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应该是什么样的呢
12楼2013-12-17 15:02:16
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cakala

新虫 (初入文坛)



小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
亲,你这个图很漂亮呢。我的总是弥散能给分析分析原因吗?你用的溶液的PH都是多少呀?
13楼2014-03-12 08:52:40
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jurkat.1640

至尊木虫 (文坛精英)



小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
做WB肯定没问题,灵敏度远远高于考染。不过你的表达不够多,我见过表达高的蛋白约占总蛋白的1/2。你的蛋白分子量大,不容易高表达
14楼2014-03-12 09:16:00
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