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jhsu627

木虫 (小有名气)

[求助] 引物GC含量只有13%,怎么扩增

引物GC含量低,用什么办法来解决?退火温度40摄氏度了,但出现了一条目的条带,请问各位:这种情况,需要增加Mg2离子含量吗?还是增加退火的时间?有什么好办法,大家有没有经验,求指教!谢谢!
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137167741

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

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一般来说,有些试剂厂家都有一些GC  buffer的,你可以买来试一下
试验顺利~~
总有一天我要修改用户名。
2楼2013-06-27 09:07:42
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t929820893

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
引物5'端增加Gs或Cs
趁着牙口好,千万不要节食
3楼2013-06-27 10:23:25
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jhsu627

木虫 (小有名气)

谢谢!
4楼2013-06-27 11:39:00
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wangchigon

金虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
不要加GGG或CCC这样的
5楼2013-06-27 16:26:39
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biology-boy

禁虫 (正式写手)

感谢参与,应助指数 +1
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6楼2013-06-27 18:56:47
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凌波丽

专家顾问 (知名作家)

【答案】应助回帖

★
感谢参与,应助指数 +1
137167741: 金币+1, 小木虫鼓励交流~~ 2013-06-28 16:14:23
楼主把引物加长点,使得GC%到40%+,或者用nest PCR用全新的引物和起始位点,不然硬用楼主现在的引物PCR效果不好,以后可能麻烦更大。
7楼2013-06-28 16:01:08
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