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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

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kx444555: 金币+3, 鼓励交流 2013-06-25 10:33:36
hedyzero: 金币+5, ★★★很有帮助 2013-06-25 11:44:58
1949stone: MolEPI+1, good 2013-06-25 12:30:21
酶切效果是与底物的量(质粒的μg数)及酶的活力(U)有关的,不能只考虑质粒体积建立酶切体系。你先把提好的质粒定量后做酶切,可以用小体积电泳检测酶切效果。一般是确认酶切完全后再做胶回收的。
如果提不出来质粒,可能是污染了杂菌或者是筛选抗生素的浓度不够。
两个酶切位点之间相差6个碱基已经不少了,应该不太影响效率,可以完全切开的。酶切后的载体最好也做胶回收。
T4连接酶一般16度过夜比较好。buffer一般不分装,当然分装会比较好。buffer需要完全融化后才能使用,一般是在室温下才能完全溶解的。融化后放在冰上操作。
连接时可以用T载体的solution I。
3楼2013-06-24 23:37:38
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