24小时热门版块排行榜    

查看: 2080  |  回复: 11

zhaofangyu

新虫 (初入文坛)

[求助] 大量培养 诱导 蛋白没有差异表达 已有1人参与

我最近在做一个蛋白的原核表达,在做小量培养,诱导后,跑SDS PAGA胶可以看到有差异表达(IPTG诱导后蛋白油很明显的表达),然而在扩大培养 (2L的培养瓶中 500ml)培养,培养条件和小量表达完全一样。可以完全不表达。菌体速度生长很快。急求解答!!!
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
5楼: Originally posted by zhaofangyu at 2013-06-19 15:01:40
是的 OD值达到0.6至0.8之间,再做的诱导。...

可能是大瓶与小规模时通气量不同。有时候是这样的。你可以试试逐步扩大体系,做一个100ml的看看。
8楼2013-06-20 00:37:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
确定大量培养诱导时菌的OD与小量培养时的完全一样吗?
2楼2013-06-19 11:33:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

shzhao113

禁虫 (著名写手)


感谢参与,应助指数 +1
myprayer: 金币+1, Gifts of roses, hand there are lingering fragrance. Look forward to your wonderful and more detailed answer. 2013-06-20 09:12:13
本帖内容被屏蔽

3楼2013-06-19 13:22:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

一壶月光

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
myprayer: 金币+1, Gifts of roses, hand there are lingering fragrance. Look forward to your wonderful and more detailed answer. 2013-06-20 09:12:22
你的表达宿主是大肠吧,小量培养诱导表达过程的条件是怎样的啊?
4楼2013-06-19 14:54:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhaofangyu

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-06-19 11:33:00
确定大量培养诱导时菌的OD与小量培养时的完全一样吗?

是的 OD值达到0.6至0.8之间,再做的诱导。
5楼2013-06-19 15:01:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhaofangyu

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
4楼: Originally posted by 一壶月光 at 2013-06-19 14:54:40
你的表达宿主是大肠吧,小量培养诱导表达过程的条件是怎样的啊?

挑单克隆在平板上扩增之后,用15ml培养基(2yt培养基)37° ,200转培养,OD值达到0.6-0.8之间时。加入IPTG。30°,200转诱导3小时。
6楼2013-06-19 15:07:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhaofangyu

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-06-19 11:33:00
确定大量培养诱导时菌的OD与小量培养时的完全一样吗?

是的 ,完全一样。只是体系变大了。小量表达是15ml.大量表达是500ml.温度,IPTG浓度都是一样的。
7楼2013-06-19 15:09:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

欧阳-90

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

我是新手啊,不是很懂。小试是不是加了IPTG菌体生长速度没有大瓶加IPTG后长得快?你试试大瓶的IPTG浓度提高
9楼2013-07-02 12:13:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lkjwyh

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

小试是不是加了IPTG菌体生长速度没有大瓶加IPTG后长得快?你试试大瓶的IPTG浓度提高
10楼2013-12-04 13:48:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 zhaofangyu 的主题更新
信息提示
请填处理意见