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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 新手求助：原核表达的问题
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zisejiguan

铜虫 (小有名气)

[求助] 新手求助：原核表达的问题

最近刚开始做原核表达，我有一些疑惑，希望高手们帮帮忙
1.原核表达活化菌的时候，是过夜培养然后接大瓶接着摇到OD值0.6，还是试管里摇到OD值0.6，放四度冰箱第二天接大瓶。还有看到有人说接大瓶的时候要离心收菌接，有必要吗？
2.表达的时候是形成包涵体好还是可溶性的蛋白好？
3.我用的pET30a（+）转化的BL21（DE3），但是有的蛋白表达不出来，表达出来的蛋白含量也很低，这个过程中是不是有什么需要注意的地方啊。
郁闷死了
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1楼 2013-06-11 16:18:25
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lxj341401

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 鼓励交流 2013-06-11 21:14:08
zisejiguan: 金币+5, ★★★很有帮助 2013-06-12 16:15:28
1、过夜培养然后接大瓶接着摇到OD值0.6左右加诱导剂诱导表达；
2、不能说哪个一定好，各有各的优势，但一般是可溶性的蛋白好，可以直接做活性等。
3、每个表达系统都有自己能表达和不能表达的蛋白，这个很正常，比如蛋白有毒性，表达量就低甚至检测不到表达。同一个表达系统对不同的蛋白表达条件还是有差异的，需要优化。如果优化后也不好，换其他表达系统试试。
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2楼2013-06-11 17:37:05
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