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raul0310

新虫 (初入文坛)

[求助] 我们做的荧光定量PCR为啥本底Rn很高？求高手帮助。

ABI7500PCR扩增结果，本底荧光量很高,尤其是图2，FAM通道，我想请教一下出现本底含量高的原因是什么，其中阴性对照本底含量也是很高（阴性对照：水+酶+引物+探针+其他，体系25UI）谢谢！求高手帮助。
我们做的荧光定量PCR为啥本底Rn很高？求高手帮助。
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我们做的荧光定量PCR为啥本底Rn很高？求高手帮助。-1
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1楼 2013-06-09 16:00:10
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阅微基因

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2013-06-09 21:54:43

有两原因：
1、试剂可能被污染。2、可能存在引物二聚体现象。
具体解决方法：
1、重新 规范的操作一边，避免污染试剂
2、就是重新设计引物了。HPLC纯化引物，减少二聚体产生，增加灵敏度；调整下引物的浓度和Tm.
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2楼2013-06-09 16:22:28
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raul0310

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 阅微基因 at 2013-06-09 16:22:28

有两原因：
1、试剂可能被污染。2、可能存在引物二聚体现象。
具体解决方法：
1、重新 规范的操作一边，避免污染试剂
2、就是重新设计引物了。HPLC纯化引物，减少二聚体产生，增加灵敏度；调整下引物的 ...

重新做结果仍然如此，我们做了8对引物和探针结果都如此。引物浓度用的是50uM。会不会有其他原因了。由于之前接触的不是ABI7500仪器，希望能帮组一下。
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3楼2013-06-13 08:32:10
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