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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 大家帮我看一下这个电泳图是怎么回事~
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seamas_gao2

新虫 (小有名气)

[求助] 大家帮我看一下这个电泳图是怎么回事~

圈出来的这条带为什么跑成这个样子了。这是用提取的RNA反转录后P的一个基因（其它几条带是一个模板，这条带是自己一个模板），应该是160bp，好像也能隐约看到，可是为什么拖的这么难看？谢谢
大家帮我看一下这个电泳图是怎么回事~
2013.6.9 - 副本.jpg

[ Last edited by seamas_gao2 on 2013-6-9 at 13:41 ]
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1楼 2013-06-09 13:40:40
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回帖置顶 ( 共有1个 )

凌波丽

专家顾问 (知名作家)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
amisking: 回帖置顶 2013-06-09 21:37:31
amisking: 金币+2, 感谢发帖应助，帮助虫子 2013-06-09 21:37:41
你那条带拖尾也太厉害了。明显是RT-PCR的反应专一性太低，原因：模板不纯（需要重提模板），循环次数太多，酶活性问题，存在污染，镁离子浓度太高，可以考虑热启动，引物太短，引物浓度太高，酶浓度过大，dNTP浓度太高。
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4楼2013-06-09 21:19:37
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普通回帖

zhoulubin

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
模板不纯，有蛋白或酚类污染
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每个年龄都有其最应该做的事，但只有过了那个年龄自己才知道
2楼2013-06-09 15:36:34
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songzuowei

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
一是模板不纯 二可能是模板浓度太高
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3楼2013-06-09 16:24:09
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seamas_gao2

新虫 (小有名气)
基本了解了，我也怀疑是模板的问题，十分感谢
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5楼2013-06-11 16:25:58
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tongyanna

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
模板浓度稀释下，注意是不是里面有污染，蛋白质残留
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自己的路，自己快乐的走
6楼2013-06-11 16:29:54
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wangkaibo123

荣誉版主 (职业作家)

kerry

优秀版主
你们RNA逆转录，怎么保证RNA不分解的？谢谢
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Domyallbesttohaveahappylife.
7楼2013-06-12 14:48:03
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黄飞220

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

引用回帖:
7楼: Originally posted by wangkaibo123 at 2013-06-12 14:48:03
你们RNA逆转录，怎么保证RNA不分解的？谢谢

RNA反转录都是试剂盒啊，，里面有Rnase inhibitor
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8楼2013-06-12 22:00:00
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