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seamas_gao2

新虫 (小有名气)

[求助] 大家帮我看一下这个电泳图是怎么回事~

圈出来的这条带为什么跑成这个样子了。这是用提取的RNA反转录后P的一个基因(其它几条带是一个模板,这条带是自己一个模板),应该是160bp,好像也能隐约看到,可是为什么拖的这么难看?谢谢
大家帮我看一下这个电泳图是怎么回事~
2013.6.9 - 副本.jpg

[ Last edited by seamas_gao2 on 2013-6-9 at 13:41 ]
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zhoulubin

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
模板不纯,有蛋白或酚类污染
每个年龄都有其最应该做的事,但只有过了那个年龄自己才知道
2楼2013-06-09 15:36:34
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songzuowei

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
一是模板不纯 二可能是模板浓度太高
3楼2013-06-09 16:24:09
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凌波丽

专家顾问 (知名作家)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
amisking: 回帖置顶 2013-06-09 21:37:31
amisking: 金币+2, 感谢发帖应助,帮助虫子 2013-06-09 21:37:41
你那条带拖尾也太厉害了。明显是RT-PCR的反应专一性太低,原因:模板不纯(需要重提模板),循环次数太多,酶活性问题,存在污染,镁离子浓度太高,可以考虑热启动,引物太短,引物浓度太高,酶浓度过大,dNTP浓度太高。
4楼2013-06-09 21:19:37
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seamas_gao2

新虫 (小有名气)

基本了解了,我也怀疑是模板的问题,十分感谢
5楼2013-06-11 16:25:58
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tongyanna

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
模板浓度稀释下,注意是不是里面有污染,蛋白质残留
自己的路,自己快乐的走
6楼2013-06-11 16:29:54
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wangkaibo123

荣誉版主 (职业作家)

kerry

优秀版主

你们RNA逆转录,怎么保证RNA不分解的?谢谢
Domyallbesttohaveahappylife.
7楼2013-06-12 14:48:03
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黄飞220

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

引用回帖:
7楼: Originally posted by wangkaibo123 at 2013-06-12 14:48:03
你们RNA逆转录,怎么保证RNA不分解的?谢谢

RNA反转录都是试剂盒啊,,里面有Rnase inhibitor
8楼2013-06-12 22:00:00
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