应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » DGGE 条带p不出来
81/1返回列表
查看: 1026  |  回复: 7
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

leeyuese

新虫 (小有名气)

[求助] DGGE 条带p不出来

DGGE 后的条带p不出来，模板为30微灭菌水浸泡24h，后-20度保存了几个月
引物为 968F 和 1401
体系25微
     buffer  2.5
        dntp     2.5
        1401   0.5
        968F   0.5
       Ex taq  0.5
       模板   2.5
       水     16
条件：94    4min   
          94    30s
          68   30s
          72   30s
          72   10min
          4        ----    共35个循环，结果就是p不出来，怎么办
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2013-06-06 14:54:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lhf903

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
退火温度是不是太高了，降低试试~
赞一下 回复此楼
2楼2013-06-06 16:52:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xiadongliang

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
68度   30s 确实很高。
我都用55度。
赞一下(1人) 回复此楼
3楼2013-06-07 09:11:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

leeyuese

新虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by xiadongliang at 2013-06-07 09:11:45
68度   30s 确实很高。
我都用55度。

我温度梯度也做了，50 55 58 60 都不行
赞一下 回复此楼
4楼2013-06-08 08:09:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xuehm2012

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
1949stone: 欢迎交流 2013-06-08 15:28:08
我问一下，我要做16s rDNA V3 区扩增，然后跑DGGE, 我看到有的文献里面提取完DNA后先做16s rDNA的扩增，然后再扩增V3 区，这样做的原因是什么，扩增效果会更好吗？
赞一下 回复此楼
5楼2013-06-08 08:45:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xiadongliang

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
1949stone: 金币+1, 鼓励分享经验 2013-06-08 15:28:40
引用回帖:
4楼: Originally posted by leeyuese at 2013-06-08 08:09:15
我温度梯度也做了，50 55 58 60 都不行...

那可能是你的模板里面的析出盐成分可能过高了或者DNA降解，导致扩增无法成功。

我以前也有这样的情况，头一天回收的胶，第二天做成功率很高过几天再做，就比较低了。
赞一下 回复此楼
6楼2013-06-08 09:32:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xiaomo6511

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
1949stone: 金币+1, 一般不会 2013-06-08 15:29:19
有没有可能是模版量太少
要不要考虑做个巢式试试
赞一下 回复此楼
7楼2013-06-08 11:06:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

leeyuese

新虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by xiadongliang at 2013-06-08 09:32:02
那可能是你的模板里面的析出盐成分可能过高了或者DNA降解，导致扩增无法成功。

我以前也有这样的情况，头一天回收的胶，第二天做成功率很高过几天再做，就比较低了。...

还有请他办法挽回吗？我想在重做DGGE了，样品没了
赞一下 回复此楼
8楼2013-06-09 10:11:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 leeyuese 的主题更新
81/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[硕博家园] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 Vi50GxzrFcSG 2026-08-07 6/300 2026-08-08 10:19 by 3OOjAIS77qg2
[基金申请] fileCode有新解读？ +8 Tide man 2026-08-08 16/800 2026-08-08 09:59 by Tide man
[硕博家园] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 HEQlVqMTIA7d 2026-08-07 5/250 2026-08-08 08:59 by 6vVgjDL4CnGu
[教师之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +3 HEQlVqMTIA7d 2026-08-07 4/200 2026-08-08 08:27 by 6vVgjDL4CnGu
[基金申请] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 KXLV3nuBVBY7 2026-08-07 4/200 2026-08-08 08:21 by 6vVgjDL4CnGu
[基金申请] 关于filecode +4 布布和一二 2026-08-07 7/350 2026-08-07 22:55 by zhanghaozhu
[基金申请] 化学口download_prp&fileCode的固定段好像这几天一直没变，有变的大神么？ +3 Tide man 2026-08-07 4/200 2026-08-07 22:39 by Tide man
[基金申请] 关于代码变化问题，想知道的进来 +9 且听虎啸 2026-08-07 12/600 2026-08-07 21:53 by 理想三旬2025
[基金申请] 听说今天filecode变了 +24 布布和一二 2026-08-06 47/2350 2026-08-07 16:02 by zhiyanjiang
[基金申请] filecode与中标关系的预测 +3 布布和一二 2026-08-07 3/150 2026-08-07 15:09 by gltch
[基金申请] 大家散了吧，后缀研究没有意义，别浪费时间了，过好目前的每一天，不要焦虑 +5 Tide man 2026-08-06 7/350 2026-08-07 13:11 by 医学老男孩
[基金申请] 关于豆爷回答的JTJC与%2F数量 +4 yang182083 2026-08-06 6/300 2026-08-07 12:43 by 虫友是什么虫
[基金申请] filecode +14 等待解的谜 2026-08-06 19/950 2026-08-07 12:20 by wlwhappy
[基金申请] 求各位大神看下 100+6 hpkpkpkp 2026-08-05 33/1650 2026-08-06 14:49 by zhiyanjiang
[基金申请] 影响面上的因素 +8 布布和一二 2026-08-05 11/550 2026-08-06 10:41 by 宝贝虫子
[基金申请] 8月时间戳变的，举个手。玩一下，释放压力 +9 archvillain 2026-08-04 11/550 2026-08-05 20:06 by wlwhappy
[基金申请] 好消息？这个有何含义？？？ +8 Tide man 2026-08-05 10/500 2026-08-05 16:14 by xmuxiaoyu
[考博] 【2027博士申请】纳米药物递送方向 20+3 13586093586 2026-08-03 4/200 2026-08-05 09:59 by lfy8008
[基金申请] 面上提前没消息，有中的吗 +14 archvillain 2026-08-02 18/900 2026-08-04 14:42 by archvillain
[基金申请] 什么时候能放榜呀？ +3 Jacob678 2026-08-03 3/150 2026-08-03 16:14 by gltch
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭