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leeyuese

新虫 (小有名气)

[求助] DGGE 条带p不出来

DGGE 后的条带p不出来,模板为30微灭菌水浸泡24h,后-20度保存了几个月
引物为 968F 和 1401
体系25微
     buffer  2.5
        dntp     2.5
        1401   0.5
        968F   0.5
       Ex taq  0.5
       模板   2.5
       水     16
条件:94    4min   
          94    30s
          68   30s
          72   30s
          72   10min
          4        ----    共35个循环,结果就是p不出来,怎么办
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leeyuese

新虫 (小有名气)

引用回帖:
6楼: Originally posted by xiadongliang at 2013-06-08 09:32:02
那可能是你的模板里面的析出盐成分可能过高了或者DNA降解,导致扩增无法成功。

我以前也有这样的情况,头一天回收的胶,第二天做成功率很高过几天再做,就比较低了。...

还有请他办法挽回吗?我想在重做DGGE了,样品没了
8楼2013-06-09 10:11:09
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lhf903

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
退火温度是不是太高了,降低试试~
2楼2013-06-06 16:52:36
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xiadongliang

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
68度   30s 确实很高。
我都用55度。
3楼2013-06-07 09:11:45
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leeyuese

新虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by xiadongliang at 2013-06-07 09:11:45
68度   30s 确实很高。
我都用55度。

我温度梯度也做了,50 55 58 60 都不行
4楼2013-06-08 08:09:15
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