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天叶之羽

新虫 (初入文坛)

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虫号: 2080768
注册: 2012-10-23
专业: 食品加工技术

[求助] 酶的硫酸铵沉淀

我做的酶的纯化，打算首先采用硫酸铵沉淀法从发酵液中得到粗酶，但是硫酸铵浓度到90%，冰箱内过夜后，再8000g离心半小时后，目的酶基本还是在溶液里，没有沉淀出来！我看文献里基本到80%就沉淀出来了。
现在我有两个疑问：1、是不是因为发酵液中蛋白含量太低（约0.1mg/mL），导致的目的酶在高硫酸氨浓度仍沉淀不出？怎样可以有效地酶没沉淀下来呢？
2、超滤对酶活有很多损失吗？

希望能在这收集到大家的建议，帮助我实验顺利进行。

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1楼2013-06-05 19:19:22

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hahamei2008

银虫 (初入文坛)

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专业: 生物化学

我做过类似的实验，你首先的摸硫酸铵的浓度，看看多大浓度下目的蛋白会沉淀，然后再用你的buffer将沉淀下来的蛋白溶解，可以加适量的DOC（脱氧胆酸钠），在跑胶看看效果。

加油

14楼2013-06-14 15:39:16

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