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原核表达蛋白
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自己构建好了载体，pET-32a的融合表达。第一次做表达，小肽，插进去的大概就是90aa的样子。由于我的目的蛋白不是现有的蛋白，我诱导条件那些要怎么样才能确定呢？是胞内表达还是胞外表达要如何确定呢？ 没有相关文献的，因为没人做过。 我想知道大概是如何确定的，我现在是用BL21和ROSSETA做表达菌，然后摇菌过夜，iptg，37度诱导1个小时，1个半小时，两个小时。转速220左右。。主要是我因为没有目的条带的大小标准。。估计是30多KD左右。。 |
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 蛋白表达纯化与检测 |
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wuwenmei
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linxt2005
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【答案】应助回帖
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xjtu0025(myprayer代发): 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，感谢你的慷慨解囊，期待你的精彩。 2013-06-05 09:09:07
xjtu0025: 金币+4 2013-06-07 16:35:50
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xjtu0025: 金币+4 2013-06-07 16:35:50
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1. 是否融合了标签呢？如果没有99aa应该是10kDa左右吧。 2. 表达过程中可以通过设置阴性对照，来对比表达的效果而间接做判断。 3. 如果有亲和标签，也可以通过WB来验证。 没有参考资料关系不大，根据目的蛋白的性质来设置表达条件就可以，一般可先测试基本的条件， 至于是胞内表达还是分泌表达，跟你使用的载体或者构建的方法有关，pET32a应该是胞内表达的。 |
3楼2013-06-05 09:04:26
4楼2013-06-07 16:35:38
