| 查看: 1083 | 回复: 4 | |||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | |||
[求助]
原核表达蛋白
|
|||
|
自己构建好了载体，pET-32a的融合表达。第一次做表达，小肽，插进去的大概就是90aa的样子。由于我的目的蛋白不是现有的蛋白，我诱导条件那些要怎么样才能确定呢？是胞内表达还是胞外表达要如何确定呢？ 没有相关文献的，因为没人做过。 我想知道大概是如何确定的，我现在是用BL21和ROSSETA做表达菌，然后摇菌过夜，iptg，37度诱导1个小时，1个半小时，两个小时。转速220左右。。主要是我因为没有目的条带的大小标准。。估计是30多KD左右。。 |
回复此楼» 收录本帖的淘帖专辑推荐
 蛋白表达纯化与检测 |
» 猜你喜欢
蛋白质检测：精准分析，解锁生物分子的密码
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之小鼠实验：严谨设计，解析生命机制的重要载体
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有220人回复
-
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
-
纳米粒度分析
已经有3人回复
-
林科院林化所招收材料与化工专业硕士，坐标南京
已经有0人回复
-
留学--博士招生
已经有15人回复
-
化学工程，本211，求调剂，ab区不限
已经有4人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 原核表达载体蛋白诱导
已经有18人回复
- 原核表达和SDS-PAGE
已经有9人回复
- 原核表达引物设计的问题
已经有6人回复
- 原核表达蛋白分子量大小
已经有13人回复
- 如何蛋白原核表达，并去掉第一个氨基酸met
已经有9人回复
- 原核表达蛋白变小
已经有4人回复
- 蛋白激酶原核表达
已经有14人回复
- 原核表达，蛋白活性问题
已经有12人回复
- 做过跨膜蛋白原核表达的战友过来看看哦
已经有18人回复
- 【资料】studier的自动诱导系统---原核诱导表达蛋白，无需IPTG
已经有125人回复
- pET-28a原核不能表达目的蛋白
已经有17人回复
- 原核表达 PET-30载体 目的蛋白分子量偏小？
已经有18人回复
- 关于用Ni-NTA His.bind树脂纯化原核表达蛋白
已经有16人回复
- 原核表达蛋白诱导不出来
已经有16人回复
- 原核表达系统不表达目的蛋白
已经有8人回复
- 原核表达和酵母表达
已经有5人回复
- 原核表达标签的切除，及信号肽的影响
已经有5人回复
- 原核同时表达两个蛋白，需要自行给其中一个加标签，请教了！！！
已经有4人回复
- 【求助】真核基因在原核生物表达
已经有4人回复
- 【求助】 关于原核表达【有效日期截止：2011年2月28日】
已经有7人回复
- 【求助/交流】原核表达蛋白纯化
已经有29人回复
4楼2013-06-07 16:35:38
王者归来001
木虫 (小有名气)
- 应助: 18 (小学生)
- 金币: 2207.1
- 帖子: 224
- 在线: 171.8小时
- 虫号: 1506780
- 注册: 2011-11-23
- 性别: GG
- 专业: 作物栽培与耕作学
2楼2013-06-04 22:59:32
linxt2005
金虫 (小有名气)
- MolEPI: 1
- 应助: 40 (小学生)
- 金币: 1250.3
- 红花: 2
- 帖子: 185
- 在线: 141.1小时
- 虫号: 2062910
- 注册: 2012-10-15
- 性别: GG
- 专业: 蛋白质组学
【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
xjtu0025(myprayer代发): 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，感谢你的慷慨解囊，期待你的精彩。 2013-06-05 09:09:07
xjtu0025: 金币+4 2013-06-07 16:35:50
感谢参与，应助指数 +1
xjtu0025(myprayer代发): 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，感谢你的慷慨解囊，期待你的精彩。 2013-06-05 09:09:07
xjtu0025: 金币+4 2013-06-07 16:35:50
|
1. 是否融合了标签呢？如果没有99aa应该是10kDa左右吧。 2. 表达过程中可以通过设置阴性对照，来对比表达的效果而间接做判断。 3. 如果有亲和标签，也可以通过WB来验证。 没有参考资料关系不大，根据目的蛋白的性质来设置表达条件就可以，一般可先测试基本的条件， 至于是胞内表达还是分泌表达，跟你使用的载体或者构建的方法有关，pET32a应该是胞内表达的。 |
3楼2013-06-05 09:04:26
wuwenmei
新虫 (小有名气)
- 应助: 10 (幼儿园)
- 金币: 1472.1
- 散金: 8
- 红花: 1
- 帖子: 280
- 在线: 54.9小时
- 虫号: 3114800
- 注册: 2014-04-05
- 性别: GG
- 专业: 蛋白质组学
5楼2015-05-28 09:46:12
