应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

CyRhmU.jpeg
小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白电泳/WB » Tricine胶应该怎么跑？
南方科技大学公共卫生及应急管理学院2025级博士研究生招生报考通知
51/1返回列表
查看: 3710  |  回复: 13
只看楼主@他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

静静秋

木虫 (正式写手)

[求助] Tricine胶应该怎么跑？已有4人参与

最经在做小分子蛋白，试过了17%和Tricine胶，Tricine胶的效果更好，楼主果断决定做Tricine胶，用的是Nature protein上面的配方，用的是两层胶，没有加尿素。电压选用的是30V跑40-50min后改用130V跑至底部，放在4℃环境中电泳时间约为3h，用的是bio-rad的mini型的电泳槽。然后固定染色脱色，出现以下问题：
  1.买的是低分子多肽作为Marker，有5个条带，最下面的两个条带有点拖尾且不清晰，有点弥散的现象，感觉上是没有怎么分开，最重要的，分子量根本对不上。
   2.Marker总是会拖着临近的样品条带，临近Marker的条带总是跑的很丑很丑。
   3.8.8KDa以下的样品条带不清楚，当然这个有可能是样品的问题，但是小分子确实没有被分开的感觉，不清楚。
   楼主下一步的想法是确认Marker应该怎么跑的问题，接着再确认超小分子跑不开的问题，请牛人帮忙解决一下，需要在胶里面加尿素吗？跑胶的电压是不是太高了呢?bio-rad电泳槽是不是只能跑普通胶不能做小分子胶呢？
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
但愿，我的天空一直蔚蓝
1楼2013-05-29 22:54:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

默涵之泪

金虫 (小有名气)
战友能否把Tricine胶的配方分享一下，不甚感激
赞一下 回复此楼
9楼2014-09-11 11:39:39
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 14 个回答

静静秋

木虫 (正式写手)
自己顶一下，各位跑过小分子胶的大神们请支招，还有我用的是16%的分离胶，目的蛋白的分子量是8KDa，是不是应该用三层胶呢？
赞一下 回复此楼
但愿，我的天空一直蔚蓝
2楼2013-05-29 23:09:41
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
静静秋(1949stone代发): 金币+1, 不错 2013-05-30 12:47:02
静静秋: 金币+5, ★★★很有帮助 2013-06-03 17:51:47
把marker稀释到tricine胶的上样buffer里点样，可以维持与样品相同的压力，就不会压迫或者收缩而影响邻近泳道。至于不清晰的问题，不知道具体情况，最好上个图。我觉得加尿素会使小带跑得更清晰，不会拖尾。
赞一下 回复此楼
3楼2013-05-30 12:34:12
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

静静秋

木虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-05-30 12:34:12
把marker稀释到tricine胶的上样buffer里点样，可以维持与样品相同的压力，就不会压迫或者收缩而影响邻近泳道。至于不清晰的问题，不知道具体情况，最好上个图。我觉得加尿素会使小带跑得更清晰，不会拖尾。

我做的是两层胶，是不是三层胶的效果会更好点？
赞一下 回复此楼
但愿，我的天空一直蔚蓝
4楼2013-06-03 17:51:32
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 14 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭