24小时热门版块排行榜    

查看: 3878  |  回复: 13
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

静静秋

木虫 (正式写手)

[求助] Tricine胶应该怎么跑? 已有4人参与

最经在做小分子蛋白,试过了17%和Tricine胶,Tricine胶的效果更好,楼主果断决定做Tricine胶,用的是Nature protein上面的配方,用的是两层胶,没有加尿素。电压选用的是30V跑40-50min后改用130V跑至底部,放在4℃环境中电泳时间约为3h,用的是bio-rad的mini型的电泳槽。然后固定染色脱色,出现以下问题:
  1.买的是低分子多肽作为Marker,有5个条带,最下面的两个条带有点拖尾且不清晰,有点弥散的现象,感觉上是没有怎么分开,最重要的,分子量根本对不上。
   2.Marker总是会拖着临近的样品条带,临近Marker的条带总是跑的很丑很丑。
   3.8.8KDa以下的样品条带不清楚,当然这个有可能是样品的问题,但是小分子确实没有被分开的感觉,不清楚。
   楼主下一步的想法是确认Marker应该怎么跑的问题,接着再确认超小分子跑不开的问题,请牛人帮忙解决一下,需要在胶里面加尿素吗?跑胶的电压是不是太高了呢?bio-rad电泳槽是不是只能跑普通胶不能做小分子胶呢?
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

但愿,我的天空一直蔚蓝
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★
静静秋: 金币+2, ★★★很有帮助, 做了三层胶,跑出来效果果然比两层好,感谢回复 2013-06-06 16:22:42
引用回帖:
4楼: Originally posted by 静静秋 at 2013-06-03 17:51:32
我做的是两层胶,是不是三层胶的效果会更好点?...

是的,我一般做三层胶。
5楼2013-06-04 01:20:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 14 个回答

静静秋

木虫 (正式写手)

自己顶一下,各位跑过小分子胶的大神们请支招,还有我用的是16%的分离胶,目的蛋白的分子量是8KDa,是不是应该用三层胶呢?
但愿,我的天空一直蔚蓝
2楼2013-05-29 23:09:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
静静秋(1949stone代发): 金币+1, 不错 2013-05-30 12:47:02
静静秋: 金币+5, ★★★很有帮助 2013-06-03 17:51:47
把marker稀释到tricine胶的上样buffer里点样,可以维持与样品相同的压力,就不会压迫或者收缩而影响邻近泳道。至于不清晰的问题,不知道具体情况,最好上个图。我觉得加尿素会使小带跑得更清晰,不会拖尾。
3楼2013-05-30 12:34:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

静静秋

木虫 (正式写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-05-30 12:34:12
把marker稀释到tricine胶的上样buffer里点样,可以维持与样品相同的压力,就不会压迫或者收缩而影响邻近泳道。至于不清晰的问题,不知道具体情况,最好上个图。我觉得加尿素会使小带跑得更清晰,不会拖尾。

我做的是两层胶,是不是三层胶的效果会更好点?
但愿,我的天空一直蔚蓝
4楼2013-06-03 17:51:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 286分人工智能专业请求调剂愿意跨考! +3 lemonzzn 2026-03-17 4/200 2026-03-20 11:04 by lemonzzn
[考研] 一志愿 南京航空航天大学大学 ,080500材料科学与工程学硕 +4 @taotao 2026-03-20 4/200 2026-03-20 10:37 by EBSD
[考研] 298-一志愿中国农业大学-求调剂 +8 手机用户 2026-03-17 8/400 2026-03-20 09:32 by 陆伶越
[论文投稿] 申请回稿延期一个月,编辑同意了。但系统上的时间没变,给编辑又写邮件了,没回复 10+3 wangf9518 2026-03-17 4/200 2026-03-19 23:55 by babero
[考研] 材料学硕318求调剂 +5 February_Feb 2026-03-19 5/250 2026-03-19 23:51 by 23Postgrad
[考研] 307求调剂 +9 冷笙123 2026-03-17 9/450 2026-03-19 22:44 by 学员8dgXkO
[考研] 332求调剂 +3 ydfyh 2026-03-17 3/150 2026-03-19 10:14 by 功夫疯狂
[考研] 354求调剂 +4 Tyoumou 2026-03-18 7/350 2026-03-18 21:45 by Tyoumou
[考研] 一志愿武理材料305分求调剂 +5 想上岸的鲤鱼 2026-03-18 6/300 2026-03-18 17:53 by 无际的草原
[考研] 08工科 320总分 求调剂 +5 梨花珞晚风 2026-03-17 5/250 2026-03-18 14:49 by haxia
[考研] 0854可跨调剂,一作一项核心论文五项专利,省、国级证书40+数一英一287 +8 小李0854 2026-03-16 8/400 2026-03-18 14:35 by 搏击518
[考研] 环境工程调剂 +8 大可digkids 2026-03-16 8/400 2026-03-18 09:36 by zhukairuo
[考研] 268求调剂 +8 一定有学上- 2026-03-14 9/450 2026-03-17 17:47 by laoshidan
[硕博家园] 湖北工业大学 生命科学与健康学院-课题组招收2026级食品/生物方向硕士 +3 1喜春8 2026-03-17 5/250 2026-03-17 17:18 by ber川cool子
[考研] [导师推荐]西南科技大学国防/材料导师推荐 +3 尖角小荷 2026-03-16 6/300 2026-03-16 23:21 by 尖角小荷
[考研] 0854控制工程 359求调剂 可跨专业 +3 626776879 2026-03-14 9/450 2026-03-16 17:42 by 626776879
[考研] 070303 总分349求调剂 +3 LJY9966 2026-03-15 5/250 2026-03-16 14:24 by xwxstudy
[考研] 0856求调剂 +3 刘梦微 2026-03-15 3/150 2026-03-16 10:00 by houyaoxu
[考研] 297一志愿上交085600求调剂 +5 指尖八千里 2026-03-14 5/250 2026-03-14 17:26 by a不易
[考研] 一志愿哈工大材料324分求调剂 +5 闫旭东 2026-03-14 5/250 2026-03-14 14:53 by 木瓜膏
信息提示
请填处理意见