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yajune铁杆木虫 (职业作家)
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关于荧光定量PCR基因扩增的问题
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| 我试验做的是药物处理以后，斑马鱼肝脏内几种基因表达量变化的试验。我选的基因里边有两个功能接近的基因，DHCR7和DHCR24，这两个是胆固醇生物合成中的脱氢胆固醇还原酶（7位和24位），两个基因的序列是从genebank上查的，然后都是用primer设计的引物。然后试验结果发现，这两个基因的结果有点过于接近，就是他们的表达量随药物处理浓度变化的趋势几乎完全一样，而其他基因则不会有这么接近趋势。再加上这两个基因的功能也一样，只是位点不同，所以我有点怀疑会不会我扩出来其实是一个基因，就是说我虽然是当两个基因设计的引物，但是由于两个基因序列很接近，其实扩增出来的是同一个基因。我以前没做过分子的试验，所以不太懂，我想问一下我说的这种情况是否有可能出现。可能性有多大？然后我怎么判断我扩增出来的这两个基因是两种还是一种？ |
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2楼2013-05-19 23:00:32
yajune
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谢谢，我用在primer-blast里边把我引物的序列输进去了，然后把生物改成了斑马鱼，别的什么都没调，直接点了get primer，这个操作正确么？下边是DHCR24出来的结果，这个结果能说明引物有特异性么 Sequence (5'->3') Length Tm GC% Self complementarity Self 3' complementarity Forward primer TCAGGTGACTGCTCTGCTCAACTCT 25 65.45 52.00 4.00 0.00 Reverse primer ACCAGACTGCCGTCAGCCAACA 22 66.63 59.09 6.00 1.00 Products on target templates >NM_001008645.1 Danio rerio 24-dehydrocholesterol reductase (dhcr24), mRNA product length = 180 Forward primer 1 TCAGGTGACTGCTCTGCTCAACTCT 25 Template 539 ......................... 563 Reverse primer 1 ACCAGACTGCCGTCAGCCAACA 22 Template 718 ...................... 697 |
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yajune
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200