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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » western blot 的结果分析 及改进
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lym19890612

新虫 (小有名气)

[求助] western blot 的结果分析 及改进

上图为内参，下图为目的蛋白，请问为何会出现这样的结果，目的蛋白的北京好像很深，怎么调整，请各位给分析一下

201305181530 beta-actin 1s79-1.jpg



201305181530  ep3 2s曝光.jpg
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1楼 2013-05-18 17:38:24
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回帖置顶 ( 共有1个 )

gwh775

新虫 (初入文坛)
★
lym19890612(gyesang代发): 金币+1, 鼓励回帖应助！ 2013-05-23 18:49:48
gyesang: 回帖置顶 2013-05-23 18:49:50
引用回帖:
5楼: Originally posted by lym19890612 at 2013-05-19 19:44:44
目的条带的位置是空心，我觉得很奇怪，为什么会这样啊...

目的条带空心是由于曝光过度，降低抗体浓度，减少曝光时间试试
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虽然压力大，但路还是要走下去
10楼2013-05-19 23:04:54
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普通回帖

晴天1882

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
lym19890612(myprayer代发): 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，感谢你的慷慨解囊，期待你的精彩。 2013-05-19 10:24:18
抗体浓度降低点，洗膜时间长点，试试看！

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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人有绝交，才有至交！
2楼2013-05-18 23:56:17
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lym19890612

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 晴天1882 at 2013-05-18 23:56:17
抗体浓度降低点，洗膜时间长点，试试看！

还可以利用这张膜进行重新孵育一抗吗？
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3楼2013-05-19 10:04:42
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晴天1882

木虫 (正式写手)
★
lym19890612(gyesang代发): 金币+1, 有没有好用的stripper 液推荐啊 2013-05-19 18:06:09
引用回帖:
3楼: Originally posted by lym19890612 at 2013-05-19 10:04:42
还可以利用这张膜进行重新孵育一抗吗？...

理论上可行，但不知道你的膜放了多久，用TBST多洗洗膜，把膜上的抗体先洗掉，再孵育抗体。
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人有绝交，才有至交！
4楼2013-05-19 15:54:31
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lym19890612

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 晴天1882 at 2013-05-18 23:56:17
抗体浓度降低点，洗膜时间长点，试试看！

目的条带的位置是空心，我觉得很奇怪，为什么会这样啊
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5楼2013-05-19 19:44:44
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lym19890612

新虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 晴天1882 at 2013-05-19 15:54:31
理论上可行，但不知道你的膜放了多久，用TBST多洗洗膜，把膜上的抗体先洗掉，再孵育抗体。...

昨天第一次曝光，放置了一天
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6楼2013-05-19 19:46:49
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晴天1882

木虫 (正式写手)
引用回帖:
6楼: Originally posted by lym19890612 at 2013-05-19 19:46:49
昨天第一次曝光，放置了一天...

你把膜放在哪里了？你可以试试看看。
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人有绝交，才有至交！
7楼2013-05-19 20:58:20
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晴天1882

木虫 (正式写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by lym19890612 at 2013-05-19 19:44:44
目的条带的位置是空心，我觉得很奇怪，为什么会这样啊...

哪里是空心？是左边的亮点吗？为什么内参八条，目的蛋白两条？
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人有绝交，才有至交！
8楼2013-05-19 21:03:45
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kx444555

至尊木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
lym19890612(gyesang代发): 金币+1, 鼓励回帖应助！ 2013-05-23 18:49:36
建议把样品浓度做几个梯度试试，如果抗体完全按照抗体公司protocol做还出问题的话，很多情况下都是样品浓度在搞怪，
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星陈代谢
9楼2013-05-19 22:57:05
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