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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » western blot 的结果分析 及改进
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lym19890612

新虫 (小有名气)

[求助] western blot 的结果分析 及改进

上图为内参，下图为目的蛋白，请问为何会出现这样的结果，目的蛋白的北京好像很深，怎么调整，请各位给分析一下

201305181530 beta-actin 1s79-1.jpg



201305181530  ep3 2s曝光.jpg
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1楼 2013-05-18 17:38:24
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lym19890612

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 晴天1882 at 2013-05-18 23:56:17
抗体浓度降低点，洗膜时间长点，试试看！

还可以利用这张膜进行重新孵育一抗吗？
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3楼2013-05-19 10:04:42
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lym19890612

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 晴天1882 at 2013-05-18 23:56:17
抗体浓度降低点，洗膜时间长点，试试看！

目的条带的位置是空心，我觉得很奇怪，为什么会这样啊
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5楼2013-05-19 19:44:44
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lym19890612

新虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 晴天1882 at 2013-05-19 15:54:31
理论上可行，但不知道你的膜放了多久，用TBST多洗洗膜，把膜上的抗体先洗掉，再孵育抗体。...

昨天第一次曝光，放置了一天
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6楼2013-05-19 19:46:49
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lym19890612

新虫 (小有名气)
引用回帖:
8楼: Originally posted by 晴天1882 at 2013-05-19 21:03:45
哪里是空心？是左边的亮点吗？为什么内参八条，目的蛋白两条？...

这两个都是目的条带，内参没一起曝光
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11楼2013-05-23 16:06:50
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lym19890612

新虫 (小有名气)
引用回帖:
8楼: Originally posted by 晴天1882 at 2013-05-19 21:03:45
哪里是空心？是左边的亮点吗？为什么内参八条，目的蛋白两条？...

上图是内参，下图是目的蛋白
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12楼2013-05-23 17:22:34
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lym19890612

新虫 (小有名气)
引用回帖:
10楼: Originally posted by gwh775 at 2013-05-19 23:04:54
目的条带空心是由于曝光过度，降低抗体浓度，减少曝光时间试试...

减少一下曝光时间还是空心啊
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13楼2013-05-23 17:25:31
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