| 查看: 1626 | 回复: 2 | ||
[求助]
PET-22b原核表达载体构建
|
|
本人才本科生超级菜鸟刚刚开始做原核表达，正在用PET-22b构建表达载体，基因整合在Puc-57质粒上。目的基因两端分别有HindIII和EcoRI酶切位点一共450bp左右，质粒是用magen公司的试剂盒提取的，PET-22b提的效果不理想，估算我酶切后的质粒浓度超不过20ng/μl，基因小于10ng/μl。 酶切体系：（takara的酶） 连接体系（NEB的T4 DNA Ligase） 10x M buffer 2ul 10x buffer 2ul 水 6ul 水 2ul 质粒 10ul 基因 10ul HindIII 1ul 载体 5ul EcoRI 1ul 酶 1ul 酶切37℃ 3h 连接16℃2小时（我估算基因与载体摩尔比10:1） 实验室暂且没有BL21就先转化DH5α了，阳性对照转成了，实验组一直没成功，求大神改进酶切、连接体系的指导。（本人超级菜头一次提问求大神们别笑话） |
回复此楼» 猜你喜欢
爱思维尔旗下LWT投稿
已经有9人回复
-
替拉扎明为缺氧选择性细胞毒药物研究提供新思路
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有287人回复
-
拉坦前列腺素(Latanoprost)：前列腺素F2α衍生物如何成为青光眼一线用药
已经有0人回复
-
卟啉家族中的明星分子：MESO-四(3,5-二溴-4-羟基苯基)卟啉的性质与制备
已经有1人回复
-
宠物寄生虫防治：氟雷拉纳阻断GABA受体，持效12周驱杀跳蚤蜱虫
已经有0人回复
-
为呼吸打开通道：依伐卡托的科学之旅
已经有1人回复
-
Dordaviprone（ONC201）：小分子药物在中线胶质瘤中的应用
已经有0人回复
-
依喜替康：新型喜树碱衍生物的研究进展
已经有1人回复
-
膀胱癌靶向治疗新选择：厄达替尼作用机制与耐药研究进展
已经有0人回复
-
从水母到实验室：腔肠素的发现历程与生物发光奥秘
已经有0人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- pET-22b构建好了质粒，表达不出来？
已经有7人回复
- 原核表达载体蛋白诱导
已经有18人回复
- 原核表达和SDS-PAGE
已经有9人回复
- 原核表达载体的构建
已经有37人回复
- 原核表达蛋白变小
已经有4人回复
- 蛋白激酶原核表达
已经有14人回复
- 真核表达载体 原核 区别与扩增
已经有8人回复
- 原核表达 pET32a和pET30a Western blot问题
已经有9人回复
- 原核表达形成了包涵体怎么办啊？
已经有22人回复
- 两个基因融合构建真核表达载体需要去掉信号肽吗?
已经有7人回复
- pET-28a原核不能表达目的蛋白
已经有17人回复
- 原核表达 PET-30载体 目的蛋白分子量偏小？
已经有18人回复
- 原核表达问题
已经有14人回复
- 【求助/交流】酵母表达和原核表达，在技术上有什么不同？
已经有6人回复
- 【求助/交流】连接表达载体PET-28A失败原因
已经有23人回复
- 【求助/交流】原核表达载体pGEX-4T-1对应的表达菌株
已经有6人回复
haitian0625
金虫 (小有名气)
- 应助: 7 (幼儿园)
- 金币: 1392.4
- 帖子: 123
- 在线: 56.9小时
- 虫号: 903890
- 注册: 2009-11-15
- 性别: GG
- 专业: 基因表达调控与表观遗传学
2楼2013-05-12 19:50:43
cicelyzh
铁杆木虫 (职业作家)
- MolEPI: 10
- 应助: 1662 (讲师)
- 金币: 8693.8
- 红花: 72
- 帖子: 3516
- 在线: 456小时
- 虫号: 1614001
- 注册: 2012-02-13
- 专业: 生物化学
3楼2013-05-12 22:56:46
5