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PET-22b原核表达载体构建
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本人才本科生超级菜鸟刚刚开始做原核表达，正在用PET-22b构建表达载体，基因整合在Puc-57质粒上。目的基因两端分别有HindIII和EcoRI酶切位点一共450bp左右，质粒是用magen公司的试剂盒提取的，PET-22b提的效果不理想，估算我酶切后的质粒浓度超不过20ng/μl，基因小于10ng/μl。 酶切体系：（takara的酶） 连接体系（NEB的T4 DNA Ligase） 10x M buffer 2ul 10x buffer 2ul 水 6ul 水 2ul 质粒 10ul 基因 10ul HindIII 1ul 载体 5ul EcoRI 1ul 酶 1ul 酶切37℃ 3h 连接16℃2小时（我估算基因与载体摩尔比10:1） 实验室暂且没有BL21就先转化DH5α了，阳性对照转成了，实验组一直没成功，求大神改进酶切、连接体系的指导。（本人超级菜头一次提问求大神们别笑话） |
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