| 查看: 3070 | 回复: 4 | ||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | ||
[求助]
荧光定量pcr,以及内参基因的选择。
|
||
我克隆了一个鱼的以前不知道序列的基因。2700bp。我想做一个荧光定量PCR，该如何做？我的初步想法是找这个鱼的管家基因做内参，分别设计合成内参和目的基因的荧光定量PCR引物，然后就可以做了对吗？但是这个鱼的管家基因没找到，能不能用其他鱼类的代替？这样做出来的荧光定量PCR有意义吗？以前没做过，谢谢高手指点。 |
回复此楼» 猜你喜欢
不合理蛙科研实验中的趣事：实验器材的 “乌龙”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：和实验材料的 “斗智斗勇”
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有83人回复
-
蛋白质检测：精准分析，解锁生物分子的密码
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之小鼠实验：严谨设计，解析生命机制的重要载体
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
-
纳米粒度分析
已经有3人回复
-
林科院林化所招收材料与化工专业硕士，坐标南京
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 求助荧光定量PCR统计方法
已经有7人回复
- 跑荧光定量PCR，目的基因都是NA，内参基因均跑出来了，请问是怎么回事？
已经有14人回复
- 荧光定量PCR结果如何处理
已经有12人回复
- Realtime PCR 内参与目的基因问题
已经有11人回复
- 请教PCR高手，使用SYBR Green I法进行荧光定量PCR对于产物大小有什么要求？
已经有21人回复
- 有做过荧光定量PCR的吗？
已经有9人回复
- 荧光定量PCR实验技术
已经有15人回复
- 已知秀丽隐杆线虫的引物序列，如何得到所扩增片段的长度
已经有11人回复
- 荧光定量PCR。。。求助求助
已经有17人回复
- 荧光定量PCR的模板浓度
已经有12人回复
- 荧光定量PCR cDNA怎么定量啊？
已经有12人回复
- 荧光定量PCR与普通PCR产物不一样？
已经有6人回复
- 辣椒的内参基因
已经有5人回复
- 请教real time pcr问题，谢谢！
已经有10人回复
- 敢问众位大侠每个生物的GAPDH序列都是一样的吗？
已经有8人回复
- 相对定量PCR 基线
已经有16人回复
- 【求助/交流】实时定量内参无条带！
已经有7人回复
- 【软件】定量PCR内参基因选择软件geNorm
已经有93人回复
- 【分享】荧光定量PCR简介
已经有13人回复
- 【求助/交流】关于做荧光定量pcr的模板问题
已经有12人回复
- 【求助/交流】关于pcr内参b-actine的一个问题
已经有5人回复
- 【求助/交流】关于荧光定量PCR中cdna合成的问题
已经有12人回复
3楼2013-05-10 09:25:40
新人小玥
木虫 (正式写手)
- MolEPI: 2
- 应助: 17 (小学生)
- 金币: 3203.8
- 散金: 87
- 红花: 8
- 帖子: 451
- 在线: 144.4小时
- 虫号: 704924
- 注册: 2009-02-20
- 专业: 林木遗传育种学
【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
十三-小样(myprayer代发): 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物版块期待你的更多精彩。 2013-05-10 08:36:10
十三-小样: 金币+4, ★★★很有帮助 2013-05-10 09:26:00
感谢参与，应助指数 +1
十三-小样(myprayer代发): 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物版块期待你的更多精彩。 2013-05-10 08:36:10
十三-小样: 金币+4, ★★★很有帮助 2013-05-10 09:26:00
|
1，你做qPCR的意义何在？确定了有必要做，然后进行下一步。 2，找管家基因可以按你的方法，可以选择几个备用的，在不同的组织或者不同的阶段（就是用不同的材料）试试，选择一个到两个用来做你的内参。 3，若你要做目的基因的话，就按qPCR的引物设计条件，设计合适的引物呗。 最最重要的就是，你要确定为什么要做qPCR，能解释什么问题，在整个实验设计中起到什么作用。 |
2楼2013-05-09 23:03:08
zhaolf
木虫 (著名写手)
胖虎爱唱歌
- 应助: 37 (小学生)
- 金币: 3356.7
- 红花: 10
- 帖子: 1689
- 在线: 478.3小时
- 虫号: 1872406
- 注册: 2012-06-29
- 性别: MM
- 专业: 植物遗传学
【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
十三-小样: 金币+5, ★★★很有帮助 2013-05-10 11:19:36
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖应助！ 2013-05-10 13:02:22
十三-小样: 金币+10, ★★★★★最佳答案, 谢谢你。QRT-PCR已做完，就还没处理数据 2013-05-29 21:30:04
感谢参与，应助指数 +1
十三-小样: 金币+5, ★★★很有帮助 2013-05-10 11:19:36
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖应助！ 2013-05-10 13:02:22
十三-小样: 金币+10, ★★★★★最佳答案, 谢谢你。QRT-PCR已做完，就还没处理数据 2013-05-29 21:30:04
|
1.就一个目的基因和一个内参这样做相对定量有意义吗？ 即使只有目的基因和内参基因的相对定量，也是有意义的。 2.要不要做一个cdna浓度梯度什么的？ 这个浓度梯度是在做qRT-PCR之前检测引物扩增效率的，目的基因和内参基因的引物都要做。 3.你说的没错，目前首要任务是选择好的内参基因，祝你好运！ |
4楼2013-05-10 10:40:38
5楼2013-05-10 11:19:27
