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荧光定量pcr,以及内参基因的选择。
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我克隆了一个鱼的以前不知道序列的基因。2700bp。我想做一个荧光定量PCR，该如何做？我的初步想法是找这个鱼的管家基因做内参，分别设计合成内参和目的基因的荧光定量PCR引物，然后就可以做了对吗？但是这个鱼的管家基因没找到，能不能用其他鱼类的代替？这样做出来的荧光定量PCR有意义吗？以前没做过，谢谢高手指点。 |
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1，你做qPCR的意义何在？确定了有必要做，然后进行下一步。 2，找管家基因可以按你的方法，可以选择几个备用的，在不同的组织或者不同的阶段（就是用不同的材料）试试，选择一个到两个用来做你的内参。 3，若你要做目的基因的话，就按qPCR的引物设计条件，设计合适的引物呗。 最最重要的就是，你要确定为什么要做qPCR，能解释什么问题，在整个实验设计中起到什么作用。 |
2楼2013-05-09 23:03:08
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zhaolf
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1.就一个目的基因和一个内参这样做相对定量有意义吗？ 即使只有目的基因和内参基因的相对定量，也是有意义的。 2.要不要做一个cdna浓度梯度什么的？ 这个浓度梯度是在做qRT-PCR之前检测引物扩增效率的，目的基因和内参基因的引物都要做。 3.你说的没错，目前首要任务是选择好的内参基因，祝你好运！ |
4楼2013-05-10 10:40:38
5楼2013-05-10 11:19:27
