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某人zy

铜虫 (初入文坛)

[求助] 3'race 电泳图问题

这是我跑的一次3'race电泳图,从左到右的顺序是marker、3’ outer、3‘ inner、一个只加了GSP的阴性对照、我的3’反转录产物、5‘反转录引物。
这两张图的一块胶的不同曝光程度,亮一点的可以看到3’outer和阴性对照、5‘反转录那里有东西,但是暗一点的就看不到。
我的问题是:1、为什么3’outer,那里是几条分开的带,但是我的inner确变成了弥散的了呢?是因为我inner的退火温度比outer的低吗,因为当时设计引物的时候,引物的退火温度就比较低,只有53.8。
2、阴性对照本身是不应该出现扩增条带的,那出现了会产生什么错误呢?
3、因为做过一次5’race,没做成功,就想通过跑一下5‘ 的反转录引物看看模板好不好,因为量少,所以只加了2ul的,所以感觉带很浅,几乎都看不到了,不知道这个方法对不对,大侠们是怎样检验提出来的结果好不好的呢?我用的是TAKARA的盒子。
请求各位大侠帮帮忙,看看,不胜感激~~~

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某人zy

铜虫 (初入文坛)

有大侠帮忙看看不~~
2楼2013-04-28 19:40:29
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zhanglinxia

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

验证反转录产物可以用持家基因来跑pcr啊

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
。。。
3楼2013-05-30 16:00:49
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zhanglinxia

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

验证反转录产物可以用持家基因来跑pcr啊

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
。。。
4楼2013-05-30 16:02:45
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