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3'race 电泳图问题
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这是我跑的一次3'race电泳图，从左到右的顺序是marker、3’ outer、3‘ inner、一个只加了GSP的阴性对照、我的3’反转录产物、5‘反转录引物。 这两张图的一块胶的不同曝光程度，亮一点的可以看到3’outer和阴性对照、5‘反转录那里有东西，但是暗一点的就看不到。 我的问题是：1、为什么3’outer，那里是几条分开的带，但是我的inner确变成了弥散的了呢？是因为我inner的退火温度比outer的低吗，因为当时设计引物的时候，引物的退火温度就比较低，只有53.8。 2、阴性对照本身是不应该出现扩增条带的，那出现了会产生什么错误呢？ 3、因为做过一次5’race，没做成功，就想通过跑一下5‘ 的反转录引物看看模板好不好，因为量少，所以只加了2ul的，所以感觉带很浅，几乎都看不到了，不知道这个方法对不对，大侠们是怎样检验提出来的结果好不好的呢？我用的是TAKARA的盒子。 请求各位大侠帮帮忙，看看，不胜感激~~~  20130427 3\'.jpg  20130427 3\'-1.jpg |
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