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数峰青1989铁虫 (小有名气)
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5'race 没有结果，求高人指点
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近一段时间在用takara的试剂盒做5'race，但是第二次PCR之后怎么也得不到一个清晰的条带。。。实验结果如所附图，请高人指点一二 RNA分离结果（该结果说明rna提取很成功，可以做下一步实验）.jpg  2次PCR之后产物电泳结果（没有条带，原因是什么，请高人指点）.jpg |
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【答案】应助回帖
★ ★
小丹木木: 金币+2, 鼓励应助 2013-03-29 16:03:31
gyesang: 回帖置顶 2013-05-31 16:15:43
小丹木木: 金币+2, 鼓励应助 2013-03-29 16:03:31
gyesang: 回帖置顶 2013-05-31 16:15:43
| there are so many reasons such as the quality of the cDNA library, annealing temperature, primer specificity,elongation time. I guess you may need check them one by one. I usually use primer 5 to design my primer, there are other primers design software you can choose. after this try different annealing temperature, sometimes you can add DMSO if the template is GC-rich. At the same time, give it enough extention time. If your target gene is rare, you can also try the nested PCR. |
3楼2013-03-27 02:02:13
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2楼2013-03-26 21:35:02
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4楼2013-03-29 15:28:52
platanus
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5楼2013-03-29 17:32:11
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6楼2013-03-29 21:06:12
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7楼2013-03-29 22:13:07
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9楼2013-04-01 10:38:05