应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 5'race 没有结果，求高人指点
91/1返回列表
查看: 1305  |  回复: 8
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

数峰青1989

铁虫 (小有名气)

[求助] 5'race 没有结果，求高人指点

近一段时间在用takara的试剂盒做5'race，但是第二次PCR之后怎么也得不到一个清晰的条带。。。实验结果如所附图，请高人指点一二

RNA分离结果（该结果说明rna提取很成功，可以做下一步实验）.jpg



2次PCR之后产物电泳结果（没有条带，原因是什么，请高人指点）.jpg
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2013-03-22 16:40:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

数峰青1989

铁虫 (小有名气)
难道没人知道是什么情况么
赞一下 回复此楼
2楼2013-03-26 21:35:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

robustli

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
小丹木木: 金币+2, 鼓励应助 2013-03-29 16:03:31
gyesang: 回帖置顶 2013-05-31 16:15:43
there are so many reasons such as the quality of the cDNA library, annealing temperature, primer specificity,elongation time. I guess you may need check them one by one. I usually use primer 5 to design my primer, there are other primers design software you can choose. after this try different annealing temperature, sometimes you can add DMSO if the template is GC-rich. At the same time, give it enough extention time. If your target gene is rare, you can also try the nested PCR.
赞一下(1人) 回复此楼
immunologyparasite
3楼2013-03-27 02:02:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

数峰青1989

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by robustli at 2013-03-27 02:02:13
there are so many reasons such as the quality of the cDNA library, annealing temperature, primer specificity,elongation time. I guess you may need check them one by one. I usually use primer 5 to des ...

谢谢啦，最近的几周里，我做了梯度PCR和巢式PCR，不断的在优化PCR的条件，但是始终得不到结果。于是我就想可能是我自己提取mRNA的过程中出现了问题。我计划再重新提取一遍。不过我有点疑惑：我要提的那个基因的产物是次级代谢产物，我所用的材料是苔藓类植物，我是要选用很嫩的植株，还是选长的时间稍微长一点的植株啊
赞一下 回复此楼
4楼2013-03-29 15:28:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

platanus

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
数峰青1989(gyesang代发): 金币+2, 鼓励回帖应助！ 2013-05-31 16:16:18
你提取的RNA质量很好，不知道你反转录之后有没有检测过反转录的质量，还有5‘RACE比较难做，跟引物、退火温度等等原因都有关系，多做一些尝试吧！
赞一下 回复此楼
5楼2013-03-29 17:32:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

数峰青1989

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by platanus at 2013-03-29 17:32:11
你提取的RNA质量很好，不知道你反转录之后有没有检测过反转录的质量，还有5‘RACE比较难做，跟引物、退火温度等等原因都有关系，多做一些尝试吧！

谢谢啦。。。提取完RNA之后，我就照着takara试剂盒上的步骤一步一步的做，真不知道怎么回事。。。
反转录之后怎么检测反转录的质量啊。。。这个真没有做，也不知道
赞一下 回复此楼
6楼2013-03-29 21:06:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

platanus

木虫 (著名写手)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 数峰青1989 at 2013-03-29 21:06:12
谢谢啦。。。提取完RNA之后，我就照着takara试剂盒上的步骤一步一步的做，真不知道怎么回事。。。
反转录之后怎么检测反转录的质量啊。。。这个真没有做，也不知道...

反转录之后要用看家基因检测一下反转录的质量的，因为也有可能问题出现在反转录过程的！
赞一下 回复此楼
7楼2013-03-29 22:13:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

robustli

银虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 数峰青1989 at 2013-03-29 15:28:52
谢谢啦，最近的几周里，我做了梯度PCR和巢式PCR，不断的在优化PCR的条件，但是始终得不到结果。于是我就想可能是我自己提取mRNA的过程中出现了问题。我计划再重新提取一遍。不过我有点疑惑：我要提的那个基因的产物 ...

Can you do a qpcr to detect at which state your gene express higher?
赞一下 回复此楼
immunologyparasite
8楼2013-03-29 22:20:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

数峰青1989

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by platanus at 2013-03-29 22:13:07
反转录之后要用看家基因检测一下反转录的质量的，因为也有可能问题出现在反转录过程的！...

我检测了一下反转录产物的质量，没有任何条带，只有在100bp至300bp左右有弥散的一块。。。这样说一定就是反转录出问题了。。。我再做一下试试
赞一下 回复此楼
9楼2013-04-01 10:38:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 数峰青1989 的主题更新
91/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[职场人生] 40+中年人失业后，还能找到好工作吗？ +10 xqy2009 2026-10-13 12/600 2026-10-15 19:24 by lpwang
[基金申请] 申请科研项目纯靠实力能成功吗？ 200+7 David1982 2026-10-13 11/550 2026-10-15 10:30 by zyqchem
[硕博家园] 极限拉扯，如何抉择 +11 Isak0320 2026-10-12 15/750 2026-10-14 21:55 by 猫鱼不是鱼
[论文投稿] 二审4个多月了还是Awaiting Reviewer Scores 10+3 纳斯达克ML 2026-10-11 4/200 2026-10-14 17:30 by babero
[有机交流] OpenAI又攻克数学难题了，离AI做有机合成还有多远？ +8 wangyl_123 2026-10-10 13/650 2026-10-14 15:12 by zuesli
[教师之家] 课题组会帮你通过考核么？ +4 好运来～9527 2026-10-10 7/350 2026-10-13 08:41 by xli1984
[公派出国] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 9/450 2026-10-11 22:34 by XQNyDCa1Tk5n
[公派出国] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 10/500 2026-10-11 22:26 by XQNyDCa1Tk5n
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 8/400 2026-10-11 22:26 by XQNyDCa1Tk5n
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 9/450 2026-10-11 22:15 by XQNyDCa1Tk5n
[考博] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 7/350 2026-10-11 22:11 by XQNyDCa1Tk5n
[教师之家] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 (EPI+-1)(金币-50) +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 10/500 2026-10-11 22:06 by XQNyDCa1Tk5n
[教师之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 (EPI+-1)(金币-50) +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 10/500 2026-10-11 14:25 by VOMexwnDzOFZ
[教师之家] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 (EPI+-1)(金币-50) +4 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 7/350 2026-10-11 14:05 by VOMexwnDzOFZ
[考研] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 8/400 2026-10-11 13:51 by VOMexwnDzOFZ
[硕博家园] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 8/400 2026-10-11 13:45 by VOMexwnDzOFZ
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 7/350 2026-10-11 10:54 by VOMexwnDzOFZ
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +4 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 7/350 2026-10-11 10:34 by VOMexwnDzOFZ
[考博] 招收博士生一名 +3 mandolin 2026-10-10 3/150 2026-10-11 10:21 by 不是山谷！
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +4 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 4/200 2026-10-11 03:14 by M0zrYVSAnxpE
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭