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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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数峰青1989

铁虫 (小有名气)

[求助] 5'race 没有结果，求高人指点

近一段时间在用takara的试剂盒做5'race，但是第二次PCR之后怎么也得不到一个清晰的条带。。。实验结果如所附图，请高人指点一二

RNA分离结果（该结果说明rna提取很成功，可以做下一步实验）.jpg



2次PCR之后产物电泳结果（没有条带，原因是什么，请高人指点）.jpg
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1楼 2013-03-22 16:40:30
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robustli

银虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 数峰青1989 at 2013-03-29 15:28:52
谢谢啦，最近的几周里，我做了梯度PCR和巢式PCR，不断的在优化PCR的条件，但是始终得不到结果。于是我就想可能是我自己提取mRNA的过程中出现了问题。我计划再重新提取一遍。不过我有点疑惑：我要提的那个基因的产物 ...

Can you do a qpcr to detect at which state your gene express higher?
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immunologyparasite
8楼2013-03-29 22:20:15
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数峰青1989

铁虫 (小有名气)
难道没人知道是什么情况么
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2楼2013-03-26 21:35:02
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robustli

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
小丹木木: 金币+2, 鼓励应助 2013-03-29 16:03:31
gyesang: 回帖置顶 2013-05-31 16:15:43
there are so many reasons such as the quality of the cDNA library, annealing temperature, primer specificity,elongation time. I guess you may need check them one by one. I usually use primer 5 to design my primer, there are other primers design software you can choose. after this try different annealing temperature, sometimes you can add DMSO if the template is GC-rich. At the same time, give it enough extention time. If your target gene is rare, you can also try the nested PCR.
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immunologyparasite
3楼2013-03-27 02:02:13
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数峰青1989

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by robustli at 2013-03-27 02:02:13
there are so many reasons such as the quality of the cDNA library, annealing temperature, primer specificity,elongation time. I guess you may need check them one by one. I usually use primer 5 to des ...

谢谢啦，最近的几周里，我做了梯度PCR和巢式PCR，不断的在优化PCR的条件，但是始终得不到结果。于是我就想可能是我自己提取mRNA的过程中出现了问题。我计划再重新提取一遍。不过我有点疑惑：我要提的那个基因的产物是次级代谢产物，我所用的材料是苔藓类植物，我是要选用很嫩的植株，还是选长的时间稍微长一点的植株啊
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4楼2013-03-29 15:28:52
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