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我很快乐3A87

新虫 (小有名气)

[求助] PCR图,请各位高手指点

跑的3'RACE,我是新手,第一条泳带是2000bp的maker,目的片段是400-500bp左右

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只为自己所要的幸福快乐
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蓝天飞翔

木虫 (知名作家)

奋斗,小青年

【答案】应助回帖

★
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amisking: 回帖置顶 2013-04-27 20:04:20
古可ぷ: 金币+1, 谢谢应助 2013-05-03 18:19:02
恩,你的胶没制好,再只一次胶,重跑一次吧
忙碌是一种幸福,让我们没时间体会痛苦;奔波是一种快乐,让我们真实地感受生活;疲惫是一种享受,让我们无暇空虚。
5楼2013-04-27 19:44:35
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普通回帖

德国工兵铲

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
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我很快乐3A87: 金币+1 2013-04-27 19:44:48
我很快乐3A87(gyesang代发): 金币+1, 鼓励应助交流! 2013-04-28 02:48:42
marker都跑糊了,看不清楚,你胶制的不好。

重新跑一次,如果有400-500bp的条带,可以凝胶回收,然后做转化去测序
2楼2013-04-27 17:05:02
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gyesang

荣誉版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

★ ★
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我很快乐3A87: 金币+1 2013-04-27 19:44:43
古可ぷ: 金币+1, 谢谢应助 2013-05-03 18:19:18
胶配的有问题,先跑个漂亮的胶吧,至少应该把数据的质量做的没有问题
学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
3楼2013-04-27 17:07:27
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shouhuweilai

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
我很快乐3A87: 金币+1 2013-04-27 19:44:35
我很快乐3A87(gyesang代发): 金币+1, 鼓励回帖交流! 2013-04-28 03:05:28
感觉你条带跑的很拖拉啊!先把胶做的均匀点,然后目的片段提取的纯一点,多跑几次!
佛曰:人生在世如身处荆棘之中,心不动,人不妄动,不动则不伤;如心动则人妄动, 伤其身痛其骨,于是体会到世间诸般痛苦!
4楼2013-04-27 18:12:35
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senix

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
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我很快乐3A87(gyesang代发): 金币+1, 鼓励回帖应助! 2013-05-03 18:07:19
我很快乐3A87: 金币+1 2013-05-24 15:18:32
400-500bp最好用1.5%的胶
做实验就是和上帝玩游戏!
6楼2013-04-27 19:58:05
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8601

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
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gyesang: 金币+1, 不错的建议! 2013-04-28 03:05:44
我很快乐3A87: 金币+1 2013-05-24 15:18:39
你跑胶用的sample buffer盐浓度不要太高,可以先做个试验,配制不同盐浓度的缓冲液,然后跑下marker,看哪个跑得最好。
7楼2013-04-28 02:29:04
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我很快乐3A87

新虫 (小有名气)

引用回帖:
7楼: Originally posted by 8601 at 2013-04-28 02:29:04
你跑胶用的sample buffer盐浓度不要太高,可以先做个试验,配制不同盐浓度的缓冲液,然后跑下marker,看哪个跑得最好。

TCA的浓度大家都用的一样的呀,应该不会高吧
只为自己所要的幸福快乐
8楼2013-05-03 08:40:34
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我很快乐3A87

新虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by shouhuweilai at 2013-04-27 18:12:35
感觉你条带跑的很拖拉啊!先把胶做的均匀点,然后目的片段提取的纯一点,多跑几次!

我又跑了一次,但还是跟上次一模一样,根据这个目测倒数3、4条似乎是有条带,但回收会非常困难
只为自己所要的幸福快乐
9楼2013-05-03 08:42:07
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我很快乐3A87

新虫 (小有名气)

我所用的是
PCR-Grede Water  17.25
10*Advantage 2 PCR Buffer   2.5
dNTP  0.5
exTaq 0.5
cDNA 1.25
UPM 2.5
GPS 0.5
这个没问题吧?
只为自己所要的幸福快乐
10楼2013-05-03 08:46:08
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