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我很快乐3A87

新虫 (小有名气)

[求助] PCR图，请各位高手指点

跑的3'RACE，我是新手，第一条泳带是2000bp的maker，目的片段是400-500bp左右

未命名.jpg
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只为自己所要的幸福快乐
1楼 2013-04-27 17:01:58
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回帖置顶 ( 共有1个 )

蓝天飞翔

木虫 (知名作家)

奋斗，小青年

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
amisking: 回帖置顶 2013-04-27 20:04:20
古可ぷ: 金币+1, 谢谢应助 2013-05-03 18:19:02
恩，你的胶没制好，再只一次胶，重跑一次吧
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忙碌是一种幸福，让我们没时间体会痛苦；奔波是一种快乐，让我们真实地感受生活；疲惫是一种享受，让我们无暇空虚。
5楼2013-04-27 19:44:35
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普通回帖

德国工兵铲

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
我很快乐3A87: 金币+1 2013-04-27 19:44:48
我很快乐3A87(gyesang代发): 金币+1, 鼓励应助交流！ 2013-04-28 02:48:42
marker都跑糊了，看不清楚，你胶制的不好。

重新跑一次，如果有400-500bp的条带，可以凝胶回收，然后做转化去测序
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2楼2013-04-27 17:05:02
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gyesang

荣誉版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
我很快乐3A87: 金币+1 2013-04-27 19:44:43
古可ぷ: 金币+1, 谢谢应助 2013-05-03 18:19:18
胶配的有问题，先跑个漂亮的胶吧，至少应该把数据的质量做的没有问题
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学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
3楼2013-04-27 17:07:27
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shouhuweilai

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
我很快乐3A87: 金币+1 2013-04-27 19:44:35
我很快乐3A87(gyesang代发): 金币+1, 鼓励回帖交流！ 2013-04-28 03:05:28
感觉你条带跑的很拖拉啊！先把胶做的均匀点，然后目的片段提取的纯一点，多跑几次！
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佛曰：人生在世如身处荆棘之中，心不动，人不妄动，不动则不伤；如心动则人妄动， 伤其身痛其骨，于是体会到世间诸般痛苦！
4楼2013-04-27 18:12:35
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senix

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
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我很快乐3A87(gyesang代发): 金币+1, 鼓励回帖应助！ 2013-05-03 18:07:19
我很快乐3A87: 金币+1 2013-05-24 15:18:32
400-500bp最好用1.5%的胶
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做实验就是和上帝玩游戏！
6楼2013-04-27 19:58:05
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8601

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
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gyesang: 金币+1, 不错的建议！ 2013-04-28 03:05:44
我很快乐3A87: 金币+1 2013-05-24 15:18:39
你跑胶用的sample buffer盐浓度不要太高，可以先做个试验，配制不同盐浓度的缓冲液，然后跑下marker，看哪个跑得最好。
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7楼2013-04-28 02:29:04
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我很快乐3A87

新虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 8601 at 2013-04-28 02:29:04
你跑胶用的sample buffer盐浓度不要太高，可以先做个试验，配制不同盐浓度的缓冲液，然后跑下marker，看哪个跑得最好。

TCA的浓度大家都用的一样的呀，应该不会高吧
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只为自己所要的幸福快乐
8楼2013-05-03 08:40:34
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我很快乐3A87

新虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by shouhuweilai at 2013-04-27 18:12:35
感觉你条带跑的很拖拉啊！先把胶做的均匀点，然后目的片段提取的纯一点，多跑几次！

我又跑了一次，但还是跟上次一模一样，根据这个目测倒数3、4条似乎是有条带，但回收会非常困难
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只为自己所要的幸福快乐
9楼2013-05-03 08:42:07
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我很快乐3A87

新虫 (小有名气)
我所用的是
PCR-Grede Water  17.25
10*Advantage 2 PCR Buffer   2.5
dNTP  0.5
exTaq 0.5
cDNA 1.25
UPM 2.5
GPS 0.5
这个没问题吧？
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只为自己所要的幸福快乐
10楼2013-05-03 08:46:08
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