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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » IPTG诱导表达蛋白
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匿名

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1楼 2013-04-21 23:10:09
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★
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myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香。期待你的慷慨解囊。快乐每一天鼓励虫子来到生物版块交流，期待你的精彩1 2013-04-22 08:51:39
扩大规模后由于摇震速度和培养容器问题，细菌生长和通气量都会不同，诱导结果可能有所不同。你是否严格控制了诱导前后菌的OD？
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2楼2013-04-22 01:05:07
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senix

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，鼓励应助，分子生物版块期待你的更多精彩。 2013-04-24 08:43:29
诱导前的OD值最好控制在0.8左右！
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做实验就是和上帝玩游戏！
3楼2013-04-22 09:48:53
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匿名

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4楼2013-04-22 10:07:46
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5楼2013-04-22 10:19:52
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wangqi1107

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
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myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，鼓励应助，分子生物版块期待你的更多精彩。同样期待你更详细的应助指导。 2013-04-24 08:43:49
最有可能的就是你加错君液了。你可以这样做：下次摇15ml，取10ml做扩大培养用 剩余5ml小量摇，然后对比一下看怎么回事。小批有，大批一定会有的。
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6楼2013-04-22 10:27:53
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匿名

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7楼2013-04-22 10:41:17
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
4楼: Originally posted by jianglan1991 at 2013-04-22 10:07:46
大规模培养是在2L的大三角瓶中进行的。在10mL的培养基中加入100μL的菌液，过夜摇约12个小时，然后把那10mL培养物全加入1L的培养基中，37摄氏度，220rpm,3.5h(小批诱导的时候就是3.5h,所以大批的时候我没有测OD值， ...

虽然大量表达外源蛋白会对菌生长有一定影响，一般诱导后菌量还是应该有所增加。如果你发现菌变少了，可能是培养液或者菌出了问题。诱导时菌的OD最好在0.3-0.8，保证菌的生长时期和状态。
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8楼2013-04-22 23:53:17
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山水88

木虫 (正式写手)
最近我也遇到表达的问题，楼主找到原因后告知一下，我后面也会做放大处理的，谢谢
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9楼2013-04-24 09:11:43
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匿名

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10楼2013-04-24 12:51:47
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