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山水88

木虫 (正式写手)

引用回帖:
10楼: Originally posted by jianglan1991 at 2013-04-24 12:51:47
应该是我的蛋白量比较少,所以大瓶摇后直接取样跑SDS-PAGE检测不到,后来我就收集了菌体,然后在从我的菌体收集液中取样跑电泳,诱前,诱后一对照,就发现了目的蛋白。你的表达遇到了什么问题,咱们可以相互交流一 ...

目前还是小瓶发酵,相同的质粒在BL21中表达都非常明显,但是在我这个菌中表达目的蛋白表达特别少,正在摸索诱导条件等,不过前期有一次和BL21同时做时都有大量表达,所以现在很纠结到底是什么原因了。
11楼2013-04-24 13:27:33
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chenxiang29

银虫 (正式写手)

大量培养后菌长的慢好多啊,你们一般是培养基占容器多少比例呢
smile to the world
12楼2013-05-27 12:58:42
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chyanqiu

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

我也遇到过这种情况呢。我们老板说,有可能是表达的蛋白对菌体有毒性。其实我想不通,如果真的是表达的蛋白对菌体有毒性,为什么小量表达的时候不明显呢?
13楼2013-05-27 14:40:41
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binbin309

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

诱导时注意严格控制OD值!应该就没问题了。
14楼2015-04-15 09:11:23
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经验的--愚人

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
5楼: Originally posted by jianglan1991 at 2013-04-22 10:19:52
为什么最好在0.8,我的OD值即使不在0.8,也不至于不能诱导出来吧(会不会是我的诱导表达的蛋白量很少,所以跑SDS-PAGE的时候,没有显现出来,我的蛋白是包涵体,量应该不会少,现在我也不能做Western进行验证)...

如果怕蛋白量少无法显示,可以酸碱处理,进HPLC看一下
15楼2016-02-03 17:15:37
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