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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » IPTG诱导表达蛋白
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山水88

木虫 (正式写手)
引用回帖:
10楼: Originally posted by jianglan1991 at 2013-04-24 12:51:47
应该是我的蛋白量比较少，所以大瓶摇后直接取样跑SDS-PAGE检测不到，后来我就收集了菌体，然后在从我的菌体收集液中取样跑电泳，诱前，诱后一对照，就发现了目的蛋白。你的表达遇到了什么问题，咱们可以相互交流一 ...

目前还是小瓶发酵，相同的质粒在BL21中表达都非常明显，但是在我这个菌中表达目的蛋白表达特别少，正在摸索诱导条件等，不过前期有一次和BL21同时做时都有大量表达，所以现在很纠结到底是什么原因了。
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11楼2013-04-24 13:27:33
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chenxiang29

银虫 (正式写手)
大量培养后菌长的慢好多啊，你们一般是培养基占容器多少比例呢
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smile to the world
12楼2013-05-27 12:58:42
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chyanqiu

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

我也遇到过这种情况呢。我们老板说，有可能是表达的蛋白对菌体有毒性。其实我想不通，如果真的是表达的蛋白对菌体有毒性，为什么小量表达的时候不明显呢？
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13楼2013-05-27 14:40:41
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binbin309

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

诱导时注意严格控制OD值！应该就没问题了。
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14楼2015-04-15 09:11:23
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经验的--愚人

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by jianglan1991 at 2013-04-22 10:19:52
为什么最好在0.8，我的OD值即使不在0.8，也不至于不能诱导出来吧（会不会是我的诱导表达的蛋白量很少，所以跑SDS-PAGE的时候，没有显现出来，我的蛋白是包涵体，量应该不会少，现在我也不能做Western进行验证）...

如果怕蛋白量少无法显示，可以酸碱处理，进HPLC看一下
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15楼2016-02-03 17:15:37
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