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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 大家帮我看一张电泳图片~~~
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sls19881024

银虫 (小有名气)

[求助] 大家帮我看一张电泳图片~~~

大家帮我看一下这张图，第一泳道时maker2000,2、是正常扩增的，3和4是加入单引物的，5是加入双引物，没有模板的，这到底是哪个东西污染了？

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小松
1楼 2013-04-21 20:44:04
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香。期待你的慷慨解囊。快乐每一天鼓励虫子来到生物版块交流，期待你的精彩1 2013-04-22 08:50:40
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你要的是最上面的带吗？无模板P出带，说明PCR体系有模板污染。单引物P出带，说明体系里存在引物污染。
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2楼2013-04-22 01:10:44
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sls19881024

银虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-04-22 01:10:44
你要的是最上面的带吗？无模板P出带，说明PCR体系有模板污染。单引物P出带，说明体系里存在引物污染。

可是我把所有的东西都换了新的后，只是有一个引物没有换（没法换），又出现这样的情况了  （ 泳道同上）

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小松
3楼2013-04-22 08:29:06
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wangqi1107

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
第二个泳道和第五个泳道加的东西一样吧？为什么条带大小不一样？三泳道单引物有条带，四泳道没有说明第三个泳道里的引物可能污染了模板！全部换完都怎么换的？具体点！说不定你换的东西仍然还有污染，所以要把具体信息发过来。
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4楼2013-04-22 10:42:07
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sls19881024

银虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by wangqi1107 at 2013-04-22 10:42:07
第二个泳道和第五个泳道加的东西一样吧？为什么条带大小不一样？三泳道单引物有条带，四泳道没有说明第三个泳道里的引物可能污染了模板！全部换完都怎么换的？具体点！说不定你换的东西仍然还有污染，所以要把具体信 ...

第二和第五泳道，加的东西一样，只是第五没有加模板，换东西是，PCR重新拆新包装的用，引物重新稀释~~~
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小松
5楼2013-04-22 15:01:45
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by sls19881024 at 2013-04-22 08:29:06
可是我把所有的东西都换了新的后，只是有一个引物没有换（没法换），又出现这样的情况了  （ 泳道同上）

7~8IX{GKSG9DAM233BEPU%6.jpg
...

无模板对照P出条带，但与目标条带大小不同。可能是体系里污染了痕量其它来源的DNA，造成扩增。当加入正确的模板，P出理论片段。你做这个PCR的目的是什么？如果是克隆，只要能P出正确片段就可以了。
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6楼2013-04-23 00:01:07
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sls19881024

银虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-04-23 00:01:07
无模板对照P出条带，但与目标条带大小不同。可能是体系里污染了痕量其它来源的DNA，造成扩增。当加入正确的模板，P出理论片段。你做这个PCR的目的是什么？如果是克隆，只要能P出正确片段就可以了。...

是克隆基因用~~~
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小松
7楼2013-04-23 10:16:08
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
7楼: Originally posted by sls19881024 at 2013-04-23 10:16:08
是克隆基因用~~~...

克隆基因的话，可以回收胶上的目的条带后连入载体，测序正确就没问题了。
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8楼2013-04-23 14:28:23
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wangqi1107

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

既然是克隆基因，有目的带就回收，污染了模板也没关系的。引物重新稀释还污染，可能你用的水污染了模板。PCR重新拆封的都包括什么东西，如果有你以前用的东西，也可能污染。水也可能污染了。
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9楼2013-04-23 14:35:11
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sxxuan

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
环境，水，稀释用的水或其他缓冲液也可能会污染的
既然只是用于克隆，只要有目的条带出现，割胶回收就可以了。
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你的日子如何，你的力量也必如何！
10楼2013-04-24 11:27:51
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