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aoda123

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[求助] 蛋白纯化疑问

我诱导表达的蛋白跑胶后，上清中较多，但在过柱子后，搜集的洗液中没有蛋白（组氨酸标签）。
是不是蛋白没有挂上柱子呢？怎么验证呢？
洗脱液的pH要跟蛋白的等电点一致吗？
请大家赐教

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身体健康，工作顺利

1楼 2013-04-21 10:50:24

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aoda123

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引用回帖:

8楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-04-21 18:56:57
如果是这样，可能是蛋白没有洗脱下来，你用的洗脱液咪唑浓度多少，洗了几个柱身体积？pH一般能偏离2就行了。此外，一般的亲和柱溶液里都含有一定的NaCl，可以减少蛋白沉淀。...

我们实验室用的咪唑浓度500mM，最后洗脱十次，每次1毫升