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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » PCR背景太亮，怎么办
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枫叶丹

新虫 (正式写手)

[求助] PCR背景太亮，怎么办

目的条带是1500，marker是2000，目的条带后不知道为什么那么亮，1.2.3号分别是原样品稀释20，50，100倍后的条带，我应该怎么解决呢，我测得原样品的260/280和260/230在1.8左右

未命名.jpg
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1楼 2013-04-19 09:51:04
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452201796

铁杆木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 快乐每一天鼓励新虫子来到生物版块交流，期待你的精彩1 2013-04-26 10:45:04
减少曝光时间，制胶时少加点染料
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stay hungry，stay foolish，stay young，stay alive
2楼2013-04-19 10:54:07
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SaG_W

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
枫叶丹(myprayer代发): 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，鼓励应助，分子生物版块期待你的更多精彩。 2013-04-26 10:45:17
减少引物浓度，做个梯度吧；减少循环数；如果还有现成的样品，可以试一下染色时间短一点
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3楼2013-04-19 11:10:25
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wangqi1107

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，鼓励应助，分子生物版块期待你的更多精彩。同样期待你更详细的应助指导。 2013-04-26 10:45:28
模板加的太多了，模板稀释20倍，加1ul做PCR试试。那不是曝光时间的问题。
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4楼2013-04-19 11:12:07
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叶潇

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
枫叶丹(myprayer代发): 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，鼓励应助，分子生物版块期待你的更多精彩。同样期待你更详细的应助指导。 2013-04-26 10:45:43
这个有可能是胶的问题吧，放的时间长了，就会出现拖带的情况。
如果是新做的胶，那么你们的染料是加在胶里面么，可能是染料在电泳的时候分散开的结果。
我觉得和模板没有关系。
应该是胶的问题。
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5楼2013-04-26 09:34:21
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bloodwar

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引物太多，至少减半；退火问题需要提高点
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6楼2013-04-26 09:42:13
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sl35537417

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

你做PCR目的是什么？为什么要降低背景？
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7楼2013-04-26 10:00:18
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德国工兵铲

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，鼓励应助，分子生物版块期待你的更多精彩。同样期待你更详细的应助指导。 2013-04-26 10:45:56
1 减少几个循环数，引物加少点，模板稀释50倍

2 你marker也有一点拖，可能是胶配置的也不太好。
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8楼2013-04-26 10:04:29
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710002191

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

会不会是产物降解了，我们用国产的盒子提的DNA出现过这样的散布现象
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may
9楼2013-04-26 10:10:07
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stevenshi021

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引物二聚体，跑在最前面。减少引物，凝胶上有非特异性条带，所以同意楼上说法增加退火温度。，
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10楼2013-04-26 10:59:56
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