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枫叶丹

新虫 (正式写手)

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[求助] PCR背景太亮，怎么办

目的条带是1500，marker是2000，目的条带后不知道为什么那么亮，1.2.3号分别是原样品稀释20，50，100倍后的条带，我应该怎么解决呢，我测得原样品的260/280和260/230在1.8左右

未命名.jpg

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1楼 2013-04-19 09:51:04

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wangqi1107

银虫 (小有名气)

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模板加的太多了，模板稀释20倍，加1ul做PCR试试。那不是曝光时间的问题。

4楼2013-04-19 11:12:07

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452201796

铁杆木虫 (小有名气)

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【答案】应助回帖

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myprayer: 金币+1, 快乐每一天鼓励新虫子来到生物版块交流，期待你的精彩1 2013-04-26 10:45:04

减少曝光时间，制胶时少加点染料

stay hungry，stay foolish，stay young，stay alive

2楼2013-04-19 10:54:07

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SaG_W

木虫 (正式写手)

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减少引物浓度，做个梯度吧；减少循环数；如果还有现成的样品，可以试一下染色时间短一点

3楼2013-04-19 11:10:25

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叶潇

铁虫 (初入文坛)

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枫叶丹(myprayer代发): 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，鼓励应助，分子生物版块期待你的更多精彩。同样期待你更详细的应助指导。 2013-04-26 10:45:43

这个有可能是胶的问题吧，放的时间长了，就会出现拖带的情况。
如果是新做的胶，那么你们的染料是加在胶里面么，可能是染料在电泳的时候分散开的结果。
我觉得和模板没有关系。
应该是胶的问题。

5楼2013-04-26 09:34:21

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