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xingqing3026

新虫 (小有名气)

[求助] 拜托各位个人帮忙分析下这是什么情况,好神奇呀

PCR产物跑胶出现了这种情况,第一张图为什么整个泳道都是亮的呢?这是反转录的cDNA进行PCR的结果

第二张图是普通的PCR结果有些泳道里出现蓝紫色的光,是什么原因呢?

拜托大家帮忙分析下


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yabxxh

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
西瓜(金币+5, EPI+1): cDNA本来就是各种大小的都有,cDNA加多了看起来就是这样子。蓝光的解释也挺合理。 2011-05-26 16:27:17
xingqing3026(金币+5): 嘿嘿,谢谢 2011-05-26 16:33:50
...,你的cdNA里面怎么会有DNA的,cDNA模版或者Taq加太多了吧,你是要P多大的片段啊。
至于那什么蓝光,一点也不神奇,你胆子倒挺大的,直接对着紫外就拍照了?你看道德蓝紫色的光就是你的高浓度片段和紫外线颜色的混合颜色,哈哈
2楼2011-05-26 15:49:33
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beautybanana

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
西瓜(金币+5, EPI+1): 很好~ 2011-05-26 16:25:30
xingqing3026(金币+5): 谢谢呢,嘿嘿主要是我平时一直这样操作的,第一次见这样的 2011-05-26 16:42:05
引用回帖:
Originally posted by xingqing3026 at 2011-05-26 15:40:45:
PCR产物跑胶出现了这种情况,第一张图为什么整个泳道都是亮的呢?这是反转录的cDNA进行PCR的结果

第二张图是普通的PCR结果有些泳道里出现蓝紫色的光,是什么原因呢?

拜托大家帮忙分析下
[eimg]a5/18/96782 ...

第一张图,是DNA电泳拖尾,主要从以下两个方面考虑:
1、PCR产物自身原因:
可能是由于酶量过多或酶的质量差,dNTP浓度过高,Mg2+浓度过高,退火温度过低,循环次数过多,而造成PCR的非特异性产物 过多。此外是模板的质量问题,模板不纯的话若是含有RNA的话也会出现拖尾,再者是DNA降解的可能。

2、电泳体系的问题:
(1)电泳缓冲液TAE或者TBE的污染,建议更换缓冲液。(2)上样时样品漂了,建议增加上样缓冲液的用量,以及小心加样。(3)电压太高。(4)电泳时间过长

第二张图,DNA的颜色为蓝紫光,可能和你拍照的背景有关系,如果不是,你可以好好研究研究了~
3楼2011-05-26 16:06:27
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西瓜

荣誉版主 (知名作家)

引用回帖:
Originally posted by xingqing3026 at 2011-05-26 15:40:45:
PCR产物跑胶出现了这种情况,第一张图为什么整个泳道都是亮的呢?这是反转录的cDNA进行PCR的结果

第二张图是普通的PCR结果有些泳道里出现蓝紫色的光,是什么原因呢?

拜托大家帮忙分析下
[eimg]a5/18/96782 ...

第二张图用的是什么染料?
4楼2011-05-26 16:27:50
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beautybanana

木虫 (著名写手)

应该就是对着紫外灯拍的~怎么不用凝胶成像系统呢~
5楼2011-05-26 16:31:23
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xingqing3026

新虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by yabxxh at 2011-05-26 15:49:33:
...,你的cdNA里面怎么会有DNA的,cDNA模版或者Taq加太多了吧,你是要P多大的片段啊。
至于那什么蓝光,一点也不神奇,你胆子倒挺大的,直接对着紫外就拍照了?你看道德蓝紫色的光就是你的高浓度片段和紫外线颜色 ...

嘿嘿,第一个图其实是用cDNA P过一次之后拿来做模板又P得第二轮所以应该会有DNA,嚎?我用的是LA Taq酶,目的片段1000多~~~

第二张图就是条带太亮了?真的第一次见到,所以觉得挺有意思就拍下来了
6楼2011-05-26 16:36:46
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xingqing3026

新虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by 西瓜 at 2011-05-26 16:27:50:
第二张图用的是什么染料?

用的goldview呢
7楼2011-05-26 16:39:47
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xingqing3026

新虫 (小有名气)

★ ★
西瓜(金币+2): 搞科研带着点玩的心情是很不错滴 2011-05-26 22:04:36
引用回帖:
Originally posted by beautybanana at 2011-05-26 16:31:23:
应该就是对着紫外灯拍的~怎么不用凝胶成像系统呢~

嘿嘿,我觉得凝胶成像拍不出这个彩色的效果,嘻嘻
8楼2011-05-26 16:40:38
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beautybanana

木虫 (著名写手)

引用回帖:
Originally posted by xingqing3026 at 2011-05-26 16:40:38:
嘿嘿,我觉得凝胶成像拍不出这个彩色的效果,嘻嘻

你觉得很好玩是吧~
9楼2011-05-26 16:42:41
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xingqing3026

新虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by beautybanana at 2011-05-26 16:42:41:
你觉得很好玩是吧~

嘻嘻,凝胶成像拍出来是这种效果:

10楼2011-05-26 16:48:32
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