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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 拜托各位个人帮忙分析下这是什么情况，好神奇呀
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xingqing3026

新虫 (小有名气)

[求助] 拜托各位个人帮忙分析下这是什么情况，好神奇呀

PCR产物跑胶出现了这种情况，第一张图为什么整个泳道都是亮的呢？这是反转录的cDNA进行PCR的结果

第二张图是普通的PCR结果有些泳道里出现蓝紫色的光，是什么原因呢？

拜托大家帮忙分析下
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1楼 2011-05-26 15:40:45
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xingqing3026

新虫 (小有名气)
★ ★
西瓜(金币+2): 搞科研带着点玩的心情是很不错滴 2011-05-26 22:04:36
引用回帖:
Originally posted by beautybanana at 2011-05-26 16:31:23:
应该就是对着紫外灯拍的~怎么不用凝胶成像系统呢~

嘿嘿，我觉得凝胶成像拍不出这个彩色的效果，嘻嘻
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8楼2011-05-26 16:40:38
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yabxxh

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
西瓜(金币+5, EPI+1): cDNA本来就是各种大小的都有，cDNA加多了看起来就是这样子。蓝光的解释也挺合理。 2011-05-26 16:27:17
xingqing3026(金币+5): 嘿嘿，谢谢 2011-05-26 16:33:50
...，你的cdNA里面怎么会有DNA的，cDNA模版或者Taq加太多了吧，你是要P多大的片段啊。
至于那什么蓝光，一点也不神奇，你胆子倒挺大的，直接对着紫外就拍照了？你看道德蓝紫色的光就是你的高浓度片段和紫外线颜色的混合颜色，哈哈
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2楼2011-05-26 15:49:33
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beautybanana

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
西瓜(金币+5, EPI+1): 很好~ 2011-05-26 16:25:30
xingqing3026(金币+5): 谢谢呢，嘿嘿主要是我平时一直这样操作的，第一次见这样的 2011-05-26 16:42:05
引用回帖:
Originally posted by xingqing3026 at 2011-05-26 15:40:45:
PCR产物跑胶出现了这种情况，第一张图为什么整个泳道都是亮的呢？这是反转录的cDNA进行PCR的结果

第二张图是普通的PCR结果有些泳道里出现蓝紫色的光，是什么原因呢？

拜托大家帮忙分析下
[eimg]a5/18/96782 ...

第一张图，是DNA电泳拖尾，主要从以下两个方面考虑：
1、PCR产物自身原因：
可能是由于酶量过多或酶的质量差，dNTP浓度过高，Mg2+浓度过高，退火温度过低，循环次数过多，而造成PCR的非特异性产物 过多。此外是模板的质量问题，模板不纯的话若是含有RNA的话也会出现拖尾，再者是DNA降解的可能。

2、电泳体系的问题：
（1）电泳缓冲液TAE或者TBE的污染，建议更换缓冲液。（2）上样时样品漂了，建议增加上样缓冲液的用量，以及小心加样。（3）电压太高。（4）电泳时间过长

第二张图，DNA的颜色为蓝紫光，可能和你拍照的背景有关系，如果不是，你可以好好研究研究了~
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3楼2011-05-26 16:06:27
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西瓜

荣誉版主 (知名作家)
引用回帖:
Originally posted by xingqing3026 at 2011-05-26 15:40:45:
PCR产物跑胶出现了这种情况，第一张图为什么整个泳道都是亮的呢？这是反转录的cDNA进行PCR的结果

第二张图是普通的PCR结果有些泳道里出现蓝紫色的光，是什么原因呢？

拜托大家帮忙分析下
[eimg]a5/18/96782 ...

第二张图用的是什么染料？
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4楼2011-05-26 16:27:50
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