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yabxxh

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
西瓜(金币+5, EPI+1): cDNA本来就是各种大小的都有,cDNA加多了看起来就是这样子。蓝光的解释也挺合理。 2011-05-26 16:27:17
xingqing3026(金币+5): 嘿嘿,谢谢 2011-05-26 16:33:50
...,你的cdNA里面怎么会有DNA的,cDNA模版或者Taq加太多了吧,你是要P多大的片段啊。
至于那什么蓝光,一点也不神奇,你胆子倒挺大的,直接对着紫外就拍照了?你看道德蓝紫色的光就是你的高浓度片段和紫外线颜色的混合颜色,哈哈
2楼2011-05-26 15:49:33
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智能机器人

Robot (super robot)

我们都爱小木虫

beautybanana

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
西瓜(金币+5, EPI+1): 很好~ 2011-05-26 16:25:30
xingqing3026(金币+5): 谢谢呢,嘿嘿主要是我平时一直这样操作的,第一次见这样的 2011-05-26 16:42:05
引用回帖:
Originally posted by xingqing3026 at 2011-05-26 15:40:45:
PCR产物跑胶出现了这种情况,第一张图为什么整个泳道都是亮的呢?这是反转录的cDNA进行PCR的结果

第二张图是普通的PCR结果有些泳道里出现蓝紫色的光,是什么原因呢?

拜托大家帮忙分析下
[eimg]a5/18/96782 ...

第一张图,是DNA电泳拖尾,主要从以下两个方面考虑:
1、PCR产物自身原因:
可能是由于酶量过多或酶的质量差,dNTP浓度过高,Mg2+浓度过高,退火温度过低,循环次数过多,而造成PCR的非特异性产物 过多。此外是模板的质量问题,模板不纯的话若是含有RNA的话也会出现拖尾,再者是DNA降解的可能。

2、电泳体系的问题:
(1)电泳缓冲液TAE或者TBE的污染,建议更换缓冲液。(2)上样时样品漂了,建议增加上样缓冲液的用量,以及小心加样。(3)电压太高。(4)电泳时间过长

第二张图,DNA的颜色为蓝紫光,可能和你拍照的背景有关系,如果不是,你可以好好研究研究了~
3楼2011-05-26 16:06:27
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