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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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xingqing3026

兑换贵宾

优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！

[求助] 拜托各位个人帮忙分析下这是什么情况，好神奇呀

PCR产物跑胶出现了这种情况，第一张图为什么整个泳道都是亮的呢？这是反转录的cDNA进行PCR的结果

第二张图是普通的PCR结果有些泳道里出现蓝紫色的光，是什么原因呢？

拜托大家帮忙分析下
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1楼 2011-05-26 15:40:45
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xingqing3026

兑换贵宾

优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！
引用回帖:
Originally posted by yabxxh at 2011-05-26 15:49:33:
...，你的cdNA里面怎么会有DNA的，cDNA模版或者Taq加太多了吧，你是要P多大的片段啊。
至于那什么蓝光，一点也不神奇，你胆子倒挺大的，直接对着紫外就拍照了？你看道德蓝紫色的光就是你的高浓度片段和紫外线颜色 ...

嘿嘿，第一个图其实是用cDNA P过一次之后拿来做模板又P得第二轮所以应该会有DNA，嚎？我用的是LA Taq酶，目的片段1000多~~~

第二张图就是条带太亮了？真的第一次见到，所以觉得挺有意思就拍下来了
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6楼2011-05-26 16:36:46
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yabxxh

超级版主

优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
西瓜(金币+5, EPI+1): cDNA本来就是各种大小的都有，cDNA加多了看起来就是这样子。蓝光的解释也挺合理。 2011-05-26 16:27:17
xingqing3026(金币+5): 嘿嘿，谢谢 2011-05-26 16:33:50
...，你的cdNA里面怎么会有DNA的，cDNA模版或者Taq加太多了吧，你是要P多大的片段啊。
至于那什么蓝光，一点也不神奇，你胆子倒挺大的，直接对着紫外就拍照了？你看道德蓝紫色的光就是你的高浓度片段和紫外线颜色的混合颜色，哈哈
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2楼2011-05-26 15:49:33
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beautybanana

专家顾问

优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
西瓜(金币+5, EPI+1): 很好~ 2011-05-26 16:25:30
xingqing3026(金币+5): 谢谢呢，嘿嘿主要是我平时一直这样操作的，第一次见这样的 2011-05-26 16:42:05
引用回帖:
Originally posted by xingqing3026 at 2011-05-26 15:40:45:
PCR产物跑胶出现了这种情况，第一张图为什么整个泳道都是亮的呢？这是反转录的cDNA进行PCR的结果

第二张图是普通的PCR结果有些泳道里出现蓝紫色的光，是什么原因呢？

拜托大家帮忙分析下
[eimg]a5/18/96782 ...

第一张图，是DNA电泳拖尾，主要从以下两个方面考虑：
1、PCR产物自身原因：
可能是由于酶量过多或酶的质量差，dNTP浓度过高，Mg2+浓度过高，退火温度过低，循环次数过多，而造成PCR的非特异性产物 过多。此外是模板的质量问题，模板不纯的话若是含有RNA的话也会出现拖尾，再者是DNA降解的可能。

2、电泳体系的问题：
（1）电泳缓冲液TAE或者TBE的污染，建议更换缓冲液。（2）上样时样品漂了，建议增加上样缓冲液的用量，以及小心加样。（3）电压太高。（4）电泳时间过长

第二张图，DNA的颜色为蓝紫光，可能和你拍照的背景有关系，如果不是，你可以好好研究研究了~
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3楼2011-05-26 16:06:27
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西瓜

禁虫
引用回帖:
Originally posted by xingqing3026 at 2011-05-26 15:40:45:
PCR产物跑胶出现了这种情况，第一张图为什么整个泳道都是亮的呢？这是反转录的cDNA进行PCR的结果

第二张图是普通的PCR结果有些泳道里出现蓝紫色的光，是什么原因呢？

拜托大家帮忙分析下
[eimg]a5/18/96782 ...

第二张图用的是什么染料？
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4楼2011-05-26 16:27:50
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