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请教基因载体跑琼脂糖凝胶电泳的结果无条带问题
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各位虫友，我做的是聚合物/DNA的纳米粒子凝胶电泳。聚合物/DNA溶液含1微克DNA，总体积为80微升。上样时取10微升溶液，与2微升loading buffer混合。电压100V，跑30min。EB 0.5微克/ml 染色1h，脱色0.5h。问题出现了，由于凝胶成像仪坏了，我用实验室254nm的普通紫外分析仪照了一下，什么东西都没有！ （我做的东西不需要将条带分开，每个孔对应一个带即可，我是通过带的位置判断带正电聚合物能不能跟负电DNA完全结合，如果不能完全结合，会往阳极移动，否则会留在上样孔内。） 我从小木虫以前的帖子中查找了一下，可能的原因：1、DNA上样量少。我计算了一下，每孔中加入的液体总DNA含量约100ng，有帖子说1-10ngDNA都能分析出来，不知道我加的量是不是太少？2、波长问题。我查到的可以用254nm紫外光，是实验室普通仪器太简陋还是别的原因？3、由于本人新手，可能上样时移液器枪头扎破了样品槽底部，但15个槽不可能都破，跑的时候我侧面观察有1-2个样品槽可能漏了，但大部分槽是好的。4、不存在DNA跑出胶的情况，但脱色时由于仪器故障脱色了4个h，拿出来以后胶上面没有上样buffer的蓝色痕迹（刚跑完会有两种蓝色的痕迹），这是说明我染色时间过长所以EB染色不好吗？这会导致最终看不出条带吗？5、凝胶成像仪器坏了有没有较好的替代方案？254nm紫外灯是不是根本不可行？ 我是生物实验新手，遇到这种问题很着急，如果有了解原因或者做过相关实验的虫友，请不吝赐教！谢谢 |
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5楼2013-04-17 21:27:31
cicelyzh
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4楼2013-04-16 13:07:58
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