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关于重组蛋白的表达
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| 我做了个重组蛋白，不大，目的片段核苷酸才200bp，但是表达出来就是包涵体！我低温诱导过，没有表达。不知道是怎么了！我想问低温诱导菌的浓度多少比较合适，我是在比较浓的时候诱导的，16度过夜！而且包涵体我纯化，到洗的时候就是一坨一坨的，重悬不起来，都没什么效果！请大家指教一下，谢谢！ |
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【答案】应助回帖
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感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+3, 鼓励交流应助 2013-04-07 17:22:32
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小丹木木: 金币+3, 鼓励交流应助 2013-04-07 17:22:32
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低温下不表达有点奇怪.低温诱导和37C诱导没有操作上的区别,就是温度而已,因为让蛋白合成慢一点, suppose可以让蛋白有更多的时间去fold. 你去查查你的protein有没有cystine以及disulphide bond,如果有很多,不溶的问题庶几可救.否则就只能是变性的方法纯化了,6M urea 或者6M guanidine. after dialysis, some of the proteins may refold into the correct conformation, but a large portion will aggregate and precipitate |
2楼2013-04-07 15:13:04
