24小时热门版块排行榜    

查看: 1332  |  回复: 4
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

317186304

银虫 (小有名气)

[求助] 鼠基因组的PCR扩增

一直在PCR扩增小鼠的基因组,引物设计了四对, 一直没有扩出来,求助呀??
目的片段长度为900左右。有时候用15ul的体系能扩增出来,但是扩大到50ul就扩不出来了。而且现在用相同的体系竟然又扩不出来了???
我在目的片段的下游成功的扩增出来了一段900bp的片段,但用相同的体系和反应条件一直扩不出来。而且扩出来的那次条带很弱,不能回收 求助呀
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

宋虫虫

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励应助! 2013-04-05 13:16:15
15ul的体系浓度能达到扩增的效果,说明实验体系中各方面的因素都在可控之内,之后你又用15ul体系来扩增反而扩不出来,这时候你就要分析一下的实验各方面有没有出现于之前不同的因素找出原因所在(比如:模板、引物。底物浓度)。实验时不要随便改变反应体系改了一项,其他的底物浓度都要更改,变量因素更多,不如在一个体系中不断优化,再进行体系的更改效果会更好。
让自己变得更强
5楼2013-04-05 12:36:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 5 个回答

gyesang

荣誉版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
myprayer: 金币+2, 鼓励应助,分子生物期待你的精彩。 2013-04-05 13:00:48
你用什么酶扩增的,以基因组为模板扩启动子,建议使用taq酶,而不是使用PFU等高保真酶,pfu等高保真很容易扩不出来,用Taq酶虽然有时会有突变,但多测几个克隆也是能筛选到的
学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
2楼2013-04-04 13:38:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

317186304

银虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by gyesang at 2013-04-04 13:38:06
你用什么酶扩增的,以基因组为模板扩启动子,建议使用taq酶,而不是使用PFU等高保真酶,pfu等高保真很容易扩不出来,用Taq酶虽然有时会有突变,但多测几个克隆也是能筛选到的

我用的的Invitrogen的Platinum supermix, 用的是Ta酶。一直用的都是Taq酶
3楼2013-04-04 19:25:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
gyesang: 金币+1, 鼓励应助! 2013-04-05 13:16:28
可能是模板的问题。反复冻融对基因组DNA的损伤还是很大的,试试稍微增加一些模板量P。
4楼2013-04-05 01:00:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 投票:  有多少人是今天查系统知道结果的? +17 爱看书的可乐 2026-08-26 19/950 2026-09-02 00:19 by xiangy672
[基金申请] 面上合作单位盖章 +6 ssyjh 2026-08-27 9/450 2026-09-01 20:01 by huagongfeihu
[基金申请] 面上函评意见出来了,像什么等级? 20+4 Tsingking1 2026-08-27 17/850 2026-09-01 19:51 by 超级无敌华子
[基金申请] 为什么国自然不能直接公布 +5 bjdxyxy 2026-08-26 5/250 2026-09-01 17:54 by 小伟大博士
[文学芳草园] 梦想 +5 myrtle 2026-08-26 7/350 2026-09-01 15:18 by myrtle
[基金申请] 学科评审组评审是指会评吗? +4 瞬息宇宙 2026-08-31 4/200 2026-09-01 14:58 by jiaoxg
[基金申请] 国社科又开始会评了,不知道这次命运如何 +7 雨打竹帘 2026-08-30 11/550 2026-08-31 23:16 by hittle2008
[基金申请] 基金未中,这种答复是模板吗? +6 zhaosm1982 2026-08-27 7/350 2026-08-31 21:18 by qdxxmc
[基金申请] 中青基了要发朋友圈吗? +7 349506619 2026-08-28 7/350 2026-08-31 13:39 by 冼亮淀粉酶
[基金申请] 基金不中,共勉 +12 eulota 2026-08-26 12/600 2026-08-31 08:42 by ZJTJZ
[基金申请] 有没有仍没收到信息的 +7 德尚中行 2026-08-27 8/400 2026-08-30 20:52 by purplejack
[考博] 找导师 +6 yuanjiabao 2026-08-29 7/350 2026-08-30 14:40 by 生科新手
[基金申请] 国自然面上复盘~欢迎讨论 (金币+15) +15 晴天加油 2026-08-26 16/800 2026-08-29 18:28 by symmetry
[基金申请] 国自然评审意见 +13 wangmingqi 2026-08-28 19/950 2026-08-29 10:22 by Poppy1104
[基金申请] 基金系统什么内容也没有 30+4 winsaint 2026-08-27 9/450 2026-08-28 11:06 by maolC
[基金申请] 看板上这么多中的,有点像50人群里49个人都是骗子的那种感觉…… +5 a089 2026-08-26 6/300 2026-08-27 14:05 by jonewore
[基金申请] 我不理解! +15 Edward_pc 2026-08-26 23/1150 2026-08-26 20:34 by zzuzxg
[基金申请] 出来了 +9 trojank 2026-08-26 9/450 2026-08-26 14:25 by 宝贝虫子
[基金申请] 国际合作可查了,中了面上 (EPI+1)(金币+50) +18 Ldrop2023 2026-08-26 18/900 2026-08-26 11:15 by cmrandy
[基金申请] 国合可查了 +3 paperzjh 2026-08-26 3/150 2026-08-26 10:41 by LemmonTr
信息提示
请填处理意见