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银虫 (小有名气)

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[求助] 鼠基因组的PCR扩增

一直在PCR扩增小鼠的基因组，引物设计了四对，一直没有扩出来，求助呀？？
目的片段长度为900左右。有时候用15ul的体系能扩增出来，但是扩大到50ul就扩不出来了。而且现在用相同的体系竟然又扩不出来了？？？
我在目的片段的下游成功的扩增出来了一段900bp的片段，但用相同的体系和反应条件一直扩不出来。而且扩出来的那次条带很弱，不能回收求助呀

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1楼2013-04-03 19:39:12

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引用回帖:

2楼: Originally posted by gyesang at 2013-04-04 13:38:06
你用什么酶扩增的，以基因组为模板扩启动子，建议使用taq酶，而不是使用PFU等高保真酶，pfu等高保真很容易扩不出来，用Taq酶虽然有时会有突变，但多测几个克隆也是能筛选到的

我用的的Invitrogen的Platinum supermix, 用的是Ta酶。一直用的都是Taq酶

3楼2013-04-04 19:25:03

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