24小时热门版块排行榜    

查看: 5469  |  回复: 8
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

sinky熹

铜虫 (初入文坛)

[求助] 双向测序序列拼接不起来

偷懒直接用的PCR产物测序,测序结果告诉我双向测序成功,但是序列拼接不起来,而且看峰图,应该是非特异性带,产物大小居然接近我的目的产物,很费解,因为电泳图中虽然有些二聚体,但也是很小的,几十bp最多了。。求讲解,,
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

测序相关问题

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sinky熹

铜虫 (初入文坛)

引用回帖:
6楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-04-03 09:36:13
问题可能出在最初PCR上。试试重新制备模板稀释引物再P一下看看。...

试过引物普通10p浓度是可以扩出目的带的。最初PCR,,,你是说我那次做的模版或者引物可能有问题么,,,
7楼2013-04-03 09:41:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 9 个回答

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
sinky熹: 金币+4 2013-04-03 09:53:18
gyesang: 金币+1, 鼓励回帖应助! 2013-05-31 23:09:23
拼接不起来是指两个引物测出的序列不能拼成一个分子?那你如何知道产物大小的?我觉得可能是PCR的时候P出的可能是分子量与目的条带接近的其他分子,有可能是PCR体系污染了。
2楼2013-04-02 22:54:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gyesang

荣誉版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
sinky熹: 金币+3, ★★★很有帮助 2013-04-03 09:53:07
把你测序获得序列放在NCBI里面blast看看是什么序列。
学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
3楼2013-04-03 01:06:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sinky熹

铜虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-04-02 22:54:10
拼接不起来是指两个引物测出的序列不能拼成一个分子?那你如何知道产物大小的?我觉得可能是PCR的时候P出的可能是分子量与目的条带接近的其他分子,有可能是PCR体系污染了。

是的,我用cap3拼不成一个分子。因为相同产物其他测出来了,跟我的目的带很近,所以我推测应该是在这个上下。
我是做浓度梯度的时候跑出了个很奇怪的图,浓度高,片段偏小,所以拿去测个序。。
4楼2013-04-03 09:24:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 2026年8月25日国自然放榜前突然收到列入评审专家邮件,有关系吗? +16 木水思豆 2026-08-25 19/950 2026-08-25 23:56 by dragonxp
[考研] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +3 7K1CJE38xLG4 2026-08-25 3/150 2026-08-25 23:20 by cNXvBfCpiZOM
[基金申请] 今天务委会开完了,明天出结果吗 +17 angus9576 2026-08-25 21/1050 2026-08-25 22:39 by 悠悠美女
[基金申请] 明天应该可查了!? +6 chengyan1220 2026-08-23 6/300 2026-08-25 19:45 by zfd97
[基金申请] 有没有大神帮我看看基金代码 28+4 1234567wang 2026-08-24 10/500 2026-08-25 19:15 by lfy8008
[基金申请] 2026国自然函评费到账 +20 羊腰板 2026-08-21 23/1150 2026-08-25 16:34 by zsna
[基金申请] 如果此刻你正在为国基感到焦虑,不妨来听听这首《基金之外》 +8 scalable 2026-08-24 8/400 2026-08-25 12:52 by jnhyjjm
[基金申请] 没有任何消息-是不是就凉了 +9 图啦图啦 2026-08-24 10/500 2026-08-25 11:59 by 南海小哥
[基金申请] 人气不行了 +11 fansofjerry 2026-08-21 11/550 2026-08-25 11:04 by 孤独的英雄6
[基金申请] 今天基金会出结果吗?20260819 +17 kkkl_v 2026-08-19 18/900 2026-08-25 09:41 by windflowerwy
[基金申请] 我面上完蛋了 +13 且听虎啸 2026-08-20 14/700 2026-08-25 09:10 by mrkang
[基金申请] 范进中举一文的中心思想 +7 炎黄贵胄 2026-08-22 8/400 2026-08-25 08:48 by ZJTJZ
[基金申请] 能否退出参与的面上项目解除限项 +21 koalala 2026-08-24 24/1200 2026-08-24 19:25 by 家与远方
[基金申请] 建议基金发布提前给出明确的时间点 +13 kulium 2026-08-21 16/800 2026-08-24 16:27 by superceng
[基金申请] 让我中一个面上吧! +13 大萍1987 2026-08-20 16/800 2026-08-24 10:23 by 太傻了
[基金申请] 时间戳今天,20号变了 +5 archvillain 2026-08-20 5/250 2026-08-22 06:12 by hui_daxiao
[基金申请] 看来今天不会放榜了? +8 chengyan1220 2026-08-21 11/550 2026-08-21 17:52 by dcqxinyang
[基金申请] 时间戳又变了 +13 wuchongjun 2026-08-20 19/950 2026-08-21 17:21 by 紫杉醇
[基金申请] 应该是下周三26日公布了吧? +4 哈哈蛤? 2026-08-21 4/200 2026-08-21 10:58 by Vivilian
[基金申请] 今天放榜没戏了吧 +9 yuleib84 2026-08-19 11/550 2026-08-21 10:06 by gltch
信息提示
请填处理意见