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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 胶回收总是不成功 求指点！！！
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yoyo单眼皮

铁虫 (小有名气)

[求助] 胶回收总是不成功 求指点！！！

PCR产物点3ul样品 电泳后1000bp条带还可以 虽然不很亮但是还可以 想做胶回收 用大孔胶点40ul电泳之后 1000bp条带很浅很浅！！！无法胶回收！！！求人指点！很捉急
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1楼 2013-03-22 11:00:19
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
yoyo单眼皮: 金币+1 2013-03-23 11:31:48
PCR产物是一条带的话一般不用切胶回收，直接用PCR产物纯化回收就可以了。
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2楼2013-03-22 12:37:13
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yoyo单眼皮

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-03-22 12:37:13
PCR产物是一条带的话一般不用切胶回收，直接用PCR产物纯化回收就可以了。

可是我不是单一条带
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3楼2013-03-22 12:48:05
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zr281069

银虫 (小有名气)
加大模板量试试 估计是体系的问题
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人物
4楼2013-03-22 15:38:30
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★
yoyo单眼皮: 金币+1, ★有帮助 2013-03-23 11:31:13
引用回帖:
3楼: Originally posted by yoyo单眼皮 at 2013-03-22 12:48:05
可是我不是单一条带...

先优化一下PCR的条件，实在不行的话多P几管。做回收胶的时候最好也跑一下marker，可以估算一下产物大致的量。
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5楼2013-03-23 00:36:15
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gaoyang636

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
yoyo单眼皮: 金币+2 2013-03-23 11:31:38
pcr条带很暗，marker亮度正常的话，就重新P吧……一般优化一下体系，还有希望的。
但是你说条带又暗，还不是单一条带，是不是引物设计得不好？
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6楼2013-03-23 09:16:48
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yoyo单眼皮

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by zr281069 at 2013-03-22 15:38:30
加大模板量试试 估计是体系的问题

3Q
7楼2013-03-23 11:31:27
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wchuangqi

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
建议做一个温度梯度PCR，优化一下PCR条件再做。要是不行的话，我觉得就直接再设计引物
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天道酬勤
8楼2013-03-24 15:22:16
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守好我的道

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

如果以上尝试过后，还不能得到足够亮的条带，可以用回收后的产物做为模板，再用原先优化过的PCR体系，再多P几管，再次回收，这样的话，特异性和亮度都会有保证，就是突变的几率会高一点，建议使用保真性好的聚合酶来扩增。
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9楼2013-03-25 21:10:00
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匿名

用户注销 (正式写手)
★ ★ ★ ★ ★ ★
yoyo单眼皮: 金币+6, ★★★很有帮助 2013-03-26 20:34:50
本帖仅楼主可见
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10楼2013-03-25 21:55:38
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