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yoyo单眼皮

铁虫 (小有名气)

[求助] 胶回收总是不成功 求指点!!!

PCR产物点3ul样品 电泳后1000bp条带还可以 虽然不很亮但是还可以 想做胶回收 用大孔胶点40ul电泳之后 1000bp条带很浅很浅!!!无法胶回收!!!求人指点!很捉急
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★
感谢参与,应助指数 +1
yoyo单眼皮: 金币+1 2013-03-23 11:31:48
PCR产物是一条带的话一般不用切胶回收,直接用PCR产物纯化回收就可以了。
2楼2013-03-22 12:37:13
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yoyo单眼皮

铁虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-03-22 12:37:13
PCR产物是一条带的话一般不用切胶回收,直接用PCR产物纯化回收就可以了。

可是我不是单一条带
3楼2013-03-22 12:48:05
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zr281069

银虫 (小有名气)

加大模板量试试 估计是体系的问题
人物
4楼2013-03-22 15:38:30
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★
yoyo单眼皮: 金币+1, ★有帮助 2013-03-23 11:31:13
引用回帖:
3楼: Originally posted by yoyo单眼皮 at 2013-03-22 12:48:05
可是我不是单一条带...

先优化一下PCR的条件,实在不行的话多P几管。做回收胶的时候最好也跑一下marker,可以估算一下产物大致的量。
5楼2013-03-23 00:36:15
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gaoyang636

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
yoyo单眼皮: 金币+2 2013-03-23 11:31:38
pcr条带很暗,marker亮度正常的话,就重新P吧……一般优化一下体系,还有希望的。
但是你说条带又暗,还不是单一条带,是不是引物设计得不好?
6楼2013-03-23 09:16:48
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yoyo单眼皮

铁虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by zr281069 at 2013-03-22 15:38:30
加大模板量试试 估计是体系的问题

3Q
7楼2013-03-23 11:31:27
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wchuangqi

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
建议做一个温度梯度PCR,优化一下PCR条件再做。要是不行的话,我觉得就直接再设计引物
天道酬勤
8楼2013-03-24 15:22:16
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守好我的道

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

如果以上尝试过后,还不能得到足够亮的条带,可以用回收后的产物做为模板,再用原先优化过的PCR体系,再多P几管,再次回收,这样的话,特异性和亮度都会有保证,就是突变的几率会高一点,建议使用保真性好的聚合酶来扩增。
9楼2013-03-25 21:10:00
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匿名

用户注销 (正式写手)

★ ★ ★ ★ ★ ★
yoyo单眼皮: 金币+6, ★★★很有帮助 2013-03-26 20:34:50
本帖仅楼主可见
10楼2013-03-25 21:55:38
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