应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » PCR中退火温度的问题
51/1返回列表
查看: 1357  |  回复: 2
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

cuicchao

金虫 (正式写手)

[交流] PCR中退火温度的问题

我设计了一对引物想拷贝全长下来，但是这对引物就好像是固定了，最终它的解链温度是49，48摄氏度，今晚我做PCR时，退火温度设置了48摄氏度，但是通常理论上要求退火温度=Tm-5～10度，而最好的退火温度又在50~55度，这样我就凌乱了。我这对引物该怎么弄呢？
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

» 抢金币啦！回帖就可以得到:

查看全部散金贴
1楼 2013-03-10 20:59:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cuicchao

金虫 (正式写手)
就我这对引物而言，关键是理论上我设置48摄氏度的话，PCR的特异性就不好了。
赞一下 回复此楼
3楼2013-03-11 09:11:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 3 个回答

熊大斌

金虫 (小有名气)
★
cuicchao(金币+1): 谢谢参与
引物的退火温度是根据你设计的引物来确定的，严格来讲在PCR扩增过程中，引物在一定的退火温度范围内都可以将目的基因克隆出来，并没有特定在哪个温度才能扩出来，除非你的目的基因序列在基因组上的同源性比较高，对引物的退火温度要求比较高，一般不用担心，如果你真的想确定哪个温度好的话，可以做一个梯度试试，摸一下温度。
赞一下 回复此楼
2楼2013-03-11 00:11:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 3 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭