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cuicchao

金虫 (正式写手)

[交流] PCR中退火温度的问题

我设计了一对引物想拷贝全长下来，但是这对引物就好像是固定了，最终它的解链温度是49，48摄氏度，今晚我做PCR时，退火温度设置了48摄氏度，但是通常理论上要求退火温度=Tm-5～10度，而最好的退火温度又在50~55度，这样我就凌乱了。我这对引物该怎么弄呢？
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1楼 2013-03-10 20:59:18
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熊大斌

金虫 (小有名气)
★
cuicchao(金币+1): 谢谢参与
引物的退火温度是根据你设计的引物来确定的，严格来讲在PCR扩增过程中，引物在一定的退火温度范围内都可以将目的基因克隆出来，并没有特定在哪个温度才能扩出来，除非你的目的基因序列在基因组上的同源性比较高，对引物的退火温度要求比较高，一般不用担心，如果你真的想确定哪个温度好的话，可以做一个梯度试试，摸一下温度。
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2楼2013-03-11 00:11:01
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cuicchao

金虫 (正式写手)
就我这对引物而言，关键是理论上我设置48摄氏度的话，PCR的特异性就不好了。
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3楼2013-03-11 09:11:45
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