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cuicchao

金虫 (正式写手)


[交流] PCR中退火温度的问题

我设计了一对引物想拷贝全长下来,但是这对引物就好像是固定了,最终它的解链温度是49,48摄氏度,今晚我做PCR时,退火温度设置了48摄氏度,但是通常理论上要求退火温度=Tm-5~10度,而最好的退火温度又在50~55度,这样我就凌乱了。我这对引物该怎么弄呢?
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熊大斌

金虫 (小有名气)



cuicchao(金币+1): 谢谢参与
引物的退火温度是根据你设计的引物来确定的,严格来讲在PCR扩增过程中,引物在一定的退火温度范围内都可以将目的基因克隆出来,并没有特定在哪个温度才能扩出来,除非你的目的基因序列在基因组上的同源性比较高,对引物的退火温度要求比较高,一般不用担心,如果你真的想确定哪个温度好的话,可以做一个梯度试试,摸一下温度。
2楼2013-03-11 00:11:01
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cuicchao

金虫 (正式写手)


就我这对引物而言,关键是理论上我设置48摄氏度的话,PCR的特异性就不好了。
3楼2013-03-11 09:11:45
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