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泽夕

新虫 (初入文坛)

[交流] 毕赤酵母电转请教 已有3人参与

毕赤酵母用80ul的GS115感受态和线性化的质粒电转后,加入1ml YPD和山梨醇的混合液,静置2h,涂3个MD平板,3天后每个平板长出超过50个菌,都是白白的,不是很小。感受态是新鲜做的。
别人看到后说他们每次转完平板上只长几个菌落,不会长这么多。
请教做过酵母电转的同仁,长这么多是不是正常的,有什么检测的方法?
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cosmoslight

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zhang8826857: 金币+1, 鼓励回帖 2013-05-10 16:29:50
不要在乎长的多少,要在乎的是质粒有没有
如果有质粒,酵母又长的多,说明你水平很高
7楼2013-05-10 09:10:17
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tanche163

捐助贵宾 (正式写手)

★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
laozuzunzhe: 金币+3, good! 2013-02-27 09:23:39
为什么要和别人一样?只要长出来是你的不就好了?
转化效率受到外源DNA量,酵母浓度的影响。
只要一步步按照protocol坐下来肯定没问题,自信点,都是很成熟的东西
我能想到的检测方法就是提基因组PCR,
阳光总在风雨后
2楼2013-02-26 22:00:18
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泽夕

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by tanche163 at 2013-02-26 22:00:18
为什么要和别人一样?只要长出来是你的不就好了?
转化效率受到外源DNA量,酵母浓度的影响。
只要一步步按照protocol坐下来肯定没问题,自信点,都是很成熟的东西
我能想到的检测方法就是提基因组PCR,

啊,都要疯了,破菌之后PCR没P出来,今天挑了6个做了表达试一下。就想知道别人的是不是也会长这么多,他们一看我的长这些,就说不靠谱。
3楼2013-02-26 22:24:03
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tanche163

捐助贵宾 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
3楼: Originally posted by 泽夕 at 2013-02-26 22:24:03
啊,都要疯了,破菌之后PCR没P出来,今天挑了6个做了表达试一下。就想知道别人的是不是也会长这么多,他们一看我的长这些,就说不靠谱。...

P都没P那说明质粒没进去,更不用谈表达了啊,找找原因,看看抗性浓度对不对,质粒对不对,菌对不对,
奇怪的是长出来的是你的酵母吗
阳光总在风雨后
4楼2013-02-27 09:20:18
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